Genetika celiakie detekcia asociovaných

Size: px

Start display at page:

Download "Genetika celiakie detekcia asociovaných"

Jodie Golden
9 years ago
Views:

1 ! Genetika celiakie detekcia asociovaných antigénov metódou microarray Elena Tibenská, Simona Duranková, Barbora Onderová Medirex, Bratislava

2 a i c n e l a v r e k o s y Celiakálna choroba (gluténová/ glutén- senzitívna enteropatia, celiakálna sprue) Øautoimunitné ochorenie postihujúce geneticky predisponovaných jedincov, spôsobené patologickou reakciou organizmu na prítomnosť lepku (komplex bielkovín v povrchovej časti obilných zŕn) v strave, na základe ktorej dochádza k poškodeniu sliznice tenkého čreva v p á ko syvøaicnelav eráp SR: predpokladaná 1:250 diagnostikovaná (január 2008) 1:677 vysoký počet nediagnostikovaných prípadov - vysoký výskyt tzv. mimočrevných foriem- najmä dospelí diagnostické oneskorenie 7 rokov Fasano, et al. Arch Intern Med 2003;163: Ciclitira PJ. Nature Clinical Practice Gastroenterology & Hepatology 2007 (4);9:483

sliznice tenkého čreva v p á ko syvøaicnelav eráp SR: predpokladaná 1:250 diagnostikovaná (január 2008) 1:677 vysoký počet nediagnostikovaných prípadov - vysoký výskyt tzv.

3 C Celiakia - mimočrevné príznaky lkové: oneskorený rast u detí, váhový úbytok, celková únava Kožné: herpetiformná dermatitída, folikulárna keratóza, pigmentácie Kostrovosvalové: osteoporóza, osteopénia, fraktúry, bolesti kostí a svalov, defekty zubnej skloviny, myopatie, tetania, artritídy Neurologické: ataxia, periférna polyneuropatia, epilepsia, šeroslepota Psychiatrické: anxieta, depresia, iritabilita, poruchy pozornosti Hematologické: anémia nejasnej etiológie (nedostatok Fe a k. listovej), trombocytóza, atrofia sleziny Reprodukčný systém: infertilita a poruchy reprodukcie u žien i mužov, opakované aborty Laboratórne nálezy: nízke hladiny sérového Fe, Ca a výrazné izolované zvýšenie aminotransferáz (v typickom prípade AST < ALT), ev. zníženie ALP, predĺžený protrombínový čas

depresia, iritabilita, poruchy pozornosti Hematologické: anémia nejasnej etiológie (nedostatok Fe a k.

4 G Celiakálny ľadovec ézie ká predispozícia: - DQ2, DQ8 Pozitívna sérologia

5 H # " % $ #" C Genetika celiakie üfamiliárny výskyt (10-12%) ü výskyt u jednovaječných dvojčiat (83-86%) oproti dvojvaječným (11%) ü prvostupňoví príbuzní - prevalencia - 10% üdruhostupňoví - 2%???? + ü polyvalentná dedičnosť ü silná HLA asociácia

dvojvaječným (11%) ü prvostupňoví príbuzní - prevalencia -

6 & ' J Genetika celiakie *)(Solid: Nature Immunology:2009,9:

7 Genetika celiakie +DQ % pacientov s celiakiou ü DQ8-8-10% pacientov ü DQ2/DQ8 negatívna CD veľmi zriedkavá (vylúčenie CD s 99% pravdepodobnosťou),dq2/dq8 positivita! CD ü bežná populácia: DQ2 ~ 30% ü DQ8 ~ 10% ü HLA DQ2 a/alebo DQ8 positivita HLA haplotypu nevyhnutná, ale nie postačujúca podmienka CD Koning et al:bpr Clin Gastro, 2005, 19:

CD ü bežná populácia: DQ2 ~ 30% ü DQ8 ~ 10% ü HLA DQ2 a/alebo DQ8 positivita HLA

8 Genetika celiakie DQA1 / DQB1 alel Megiorni and Pizzuti Journal of Biomedical Science 2012, 19:88

9 - D 1. 0/ - D :9 8 : x Genetika celiakie HLA-DQ status a riziko Celiakie 2Very high DQ2.5 (with a double dose of DQB1*02) DQ8 DQ2.5 (with a single dose of DQB1*02) DQ2.x (with a double dose of DQB1*02) DQ2.x (with a single dose of DQB1*02) DQX.5 DQX.x Very high High High High Low Extremely low Extremely low ;different from *05. X = DQB1 alleles different from *02 and *03:02 Megiorni and Pizzuti Journal of Biomedical Science 2012, 19:88

x (with a double dose of DQB1*02) DQ2.x (with a single dose of DQB1*02) DQX.5 DQX.

10 = < = < = < Genetika celiakie ü ü ü >-DQ2 = HLA-DQ2.5? >-DQ2 haplotypy DQ2.5 - DQB1*02+DQA1*05 A B- DQB1*02+DQA1*02 >-DQ 2.2 hrá úlohu pri rozvoji celiakie HLA typ Retrospektívna štúdia (n=70) Prospektívna štúdia (n=85) Spolu (n=155) HLA-DQ (90.0%) 76 (89.4%) 139 (89.7%) HLA-DQ8 2 ( 2.9%) 5 ( 5.9%) 7 ( 4.5%) HLA-DQ2.2 5 ( 7.1%) 4 ( 4.7%) 9 ( 5.8%) Mubarak et all: JPGN 2013 Apr;56(4):428-30

2 hrá úlohu pri rozvoji celiakie HLA typ Retrospektívna štúdia (n=70) Prospektívna štúdia (n=85)

11 \ E g UZ W YX Q P W Q F t g U V Pt Q R S q P m uqp j M N O d f h Tw I K` t _^ Q R S q P m uqp j M N O d f h Lb I K` t _^ ~ } z zz { Diagnostický algoritmus pri podozrení na CD (podľa ESPGHAN, 2011) ]mptomatickí pacienti (deti/adolescenti) s predpokladanou CD (gastrointestinálne príznaky, rastová retardácia, osteoporóza, anémia,..) Fti-tTG (IgA) + celkové IgA1 pozit negat CD vylúčená O [erenie: IgA deficiencia? Liečba? Vek < 2 roky? Symptómy? GFD? Asociované ochorenia? 2 & HLA DQ2/DQ8 2 Testy nedostupné Biopsia tenkého čreva EMA - HLA - EMA + HLA - EMA + HLA + EMA - HLA + Marsh 2-3 Marsh 0-1? overiť falošne pozit ttg? falošne negat HLA? liakálna choroba potvrdená D falošne negat. biopsia? falošne pozit. serologia? 1 (IgA def.- ttg IgG), 2 nová vzorka

.) Fti-tTG (IgA) + celkové IgA1 pozit negat CD vylúčená O [erenie: IgA deficiencia? Liečba? Vek < 2 roky? Symptómy? GFD? Asociované ochorenia?

12 Ž Diagnostický algoritmus pri podozrení na CD (podľa ESPGHAN, 2011) ymptomatickí pacienti s genetickým rizikom CD (prvostupňoví príbuzní, DM I.typu, Downov syndróm,...) ƒ DQ2/DQ8 ˆ -ttg (IgA) + celkové IgA1 pozit negat riziko CD vylúčené pozit. ttg > 3x ref.h. Biopsia tenkého čreva Marsh 0-1 pozit. ttg < 3x ref.h. Marsh 2-3 EMA negat. EMA + EMA - CD vylúčená? overiť o? Œ Š? f l.negat.testov? IgA deficiencia? Vek < 2 roky? GFD? Opakované sledovanie/testovanie podľa potreby? overiť? falošne pozit ttg? Opakované sledovanie/testovanie podľa potreby liakálna choroba potvrdená falošne negat. biopsia? falošne pozit. serologia? D 1 (IgA def.- ttg IgG), 2 nová vzorka

EMA + EMA - CD vylúčená? overiť o? Œ Š? f l.negat.testov? IgA deficiencia? Vek < 2 roky? GFD? Opakované sledovanie/testovanie podľa potreby? overiť? falošne pozit ttg?

13 ž š œ ž š œ The EUROArray system: Principle of DNA microarray analysis tient sample (genomic DNA) G T T C G A C A A A G C T Ÿhybridisation of sample DNA to probes on microarray Ÿdetection of the spots with hybridized PCR-products by measuring fluorescence emission capture DNAoligonucleotide (probes) šstep: amplification and labeling of target DNA target sequence by polymerase chain reaction (PCR) solid phase spot: millions of identical DNA molecules

PCR-products by measuring fluorescence emission capture DNAoligonucleotide (probes) šstep: amplification and

14 The EUROArray system

15 EUROArray HLA-DQ2/DQ8 - Advantage compared to other tests - All 4 relevant HLA alleles are determined by a single microarray incubation:

16 EUROArray HLA-DQ2/DQ8 - Advantage compared to other tests - Other tests: false positive results possible, e.g. because -subunit of HLA-DQ8 not determined #-subunits of HLA-DQ2 and -DQ8 can not be distinguished ü False positive results! x x => lower diagnostic specificity

because -subunit of HLA-DQ8 not determined #-subunits of HLA-DQ2

17 -DQA1 alleles Microarray HLA-DQ2/DQ8 Microrray HLA-DQ2/DQ8 unikátne zloženie: -DQB1 alleles

18 ª ª ª Hodnotenie HLA-DQ2/DQ8 «-DQ2.2 pozitivny pacient HLA-DQ2 DQ8 negativny pacient HLA-DQ2.5 pozitivny pacient «-DQ8 pozitivny pacient «-DQ pozitivny pacient

19 Microarray HLA-DQ2/DQ8 naše skúsenosti

20 Microarray HLA-DQ2/DQ8 naše skúsenosti

21 Microarray HLA-DQ2/DQ8 naše skúsenosti!!!nastavenie termocykléra RAMP RATE!!!

22 Microarray HLA-DQ2/DQ8 naše skúsenosti

23 HLA-DQ2/DQ8 výsledky august 2012 apríl pacientov: Muži Ženy

24 ² ± ¹ µ ¹ ¾ Ã ½ ¾ ½ Ä ¾ ½ Ã ¾ ½ HLA-DQ2/DQ8 výsledky august 2012 apríl pacientov: ³-DQ % HLA-DQ % not valid 3 0.2% DQ % DQ % DQ 2 + DQ % 5,00% 0,20% 28,70% 58,20% ¼ ¾½»º Â ÁÀ¾½¼»ºvalid Ä

25 Ñ Ð Î Ï Ë Íä Ë Ì Ê Ç Æ É È Èä Ç Æ Ç Æ É È åä Ç Æ ê Üé çè ÝçÚæ ëìë Þ Ý Óìë Þ Ý Ù ÖÕÔ Ó ß Óìë ëìë Þ Ý í Þ Ý í Þ ß Ý ëìë Þ Ý Þ ß Ý Óìë Þ Ý HLA-DQ2/DQ8 výsledky + HLA-DQ2.2 Åaugust 2012 apríl pacientov: Ò-DQ % HLA-DQ % not valid 3 0.2% DQ % DQ % DQ % DQ % Ê % 0,20% [HODNOTA] [HODNOTA] 45,20% [HODNOTA] í [HODNOTA] ß Ü ÞÝ ÛÚ ã âàþýüûúvalid [HODNOTA]

26 ù ø ø ö õ ó ô ò ñ ð ðð ïî ñ ðûúð ñ ððúð HLA-DQ2/DQ8 výsledky DGP pozit. - 2x DQ pac.: ttg+ema+dgp pozit. - 1x (potvrdená celiakia) 120,00% HLA-DQ ,00% 97,30% 80,00% 60,00% 40,00% 20,00% 1,80% ttg, EMA, DGP + ttg, EMA, DGP - DGP +

27 Záver haplotypu HLADQ2.2?

28 Ďakujem za pozornosť

Client URL. List of object servers that contain object

Client URL. List of object servers that contain object ÄÓ Ø Ò ÓÔ Ó Ç Ø Í Ò Ø ÓÑ Ò Æ Ñ ËÝ Ø Ñ ÂÙ Ã Ò Ö Ù Ã Ø Ïº ÊÓ ÁÒ Ø ØÙØ ÙÖ ÓÑ ËÓÔ ÒØ ÔÓÐ Ö Ò Ò ÖÓ ÙÖ ÓÑº Ö Â Ñ Ïº ÊÓ ÖØ Ö Ò Ì Ð ÓÑ ß Æ Ì Á Ý Ð ÅÓÙÐ Ò ÙÜ Ö Ò ØÖ Ø ½ ÁÒØÖÓ ÙØ ÓÒ ÁÒ ÓÖ Ö ØÓ Ö Ù Ú Ö Ð Ý Ò Ò ¹