BD CHROMagar Orientation Medium

Transcription

1 POKYNY NA POUŽÍVANIE PÔDA V PETRIHO MISKÁCH PRIPRAVENÁ NA POUŽITIE PA Rev.: Sep 2011 BD CHROMagar Orientation Medium POUŽITIE BD CHROMagar Orientation Medium (Orientačná pôda BD CHROMagar) je neselektívna pôda na izoláciu, priamu identifikáciu, diferenciáciu a určenie počtu patogénov v močovom trakte. Pôda BD CHROMagar Orientation Medium umožňuje diferenciáciu a identifikáciu organizmov Escherichia coli a Enterococcus bez podporného testovania. PRINCÍPY A VYSVETLENIE POSTUPU Mikrobiologická metóda. Escherichia coli, enterokoky, čeľade Klebsiella-Enterobacter-Serratia a Proteus-Morganella- Providencia patria medzi najčastejšie organizmy spôsobujúce infekcie močového traktu (=UTI). Šesťdesiat až 70 % infekcií močového traktu je spôsobených čistou kultúrou E. coli alebo v kombinácii s enterokokmi. Pri UTI u žien sa vyskytujú Staphylococcus saprophyticus a Streptococcus agalactiae, aj keď menej často. Pre odlišnú úroveň citlivosti prítomných látok na antibiotiká je nutná identifikácia ich druhov sériami biochemických testov, aby bola zaistená účinná liečba antibiotikami. Je to jedna z časovo najnáročnejších úloh v rámci spracovania vzoriek moču v laboratóriu. Najčastejšie izolované druhy alebo čeľade organizmov produkujú charakteristické enzýmy. Preto možno tieto organizmy identifikovať na úrovni druhov pomocou obmedzeného množstva testov fermentácie substrátov alebo testov využitia. 1,2 Niektoré z prítomných organizmov produkujú enzýmy na metabolizmus laktózy, glukozidu alebo oboch a iné neprodukujú žiadne z týchto enzýmov. Napríklad organizmus E. coli produkuje enzýmy metabolizmu laktózy, je však ß-glukozidáza-negatívny. Iné baktérie čeľade Enterobacteriaceae sú ß-glukozidáza-pozitívne, neobsahujú však enzýmy potrebné na fermentáciu laktózy. Ďalšie môžu obsahovať obidva typy enzýmov alebo žiadny. Betaglukozidázy sa našli aj v grampozitívnych kokoch, ako sú napríklad rod Enterococcus a Streptococcus agalactiae. Tryptofan deamináza (TDA) je enzým, ktorý sa charakteristicky nachádza v čeľadi organizmov Proteus-Morganella-Providencia. Hodnotenie účinnosti preukázalo, že pôda BD CHROMagar Orientation Medium je najvhodnejšia na bežne používané diferenciačné pôdy na izoláciu, diferenciáciu a určenie počtu patogénov UTI, ako je pôda CLED agar alebo kombinácia pôd Blood a MacConkey Agar. 3-5 BD CHROMagar Orientation Medium umožňuje identifikáciu organizmov E. coli a enterokokov priamo na izolačnej pôde, ďalej je možná predbežná identifikácia väčšiny kmeňov Staphylococcus saprophyticus a S. agalactiae a čeľadí Klebsiella-Enterobacter-Serratia (KES) a Proteus-Morganella-Providencia (PMP) pomocou zafarbenia kolónií a pôdy. Pretože pôda BD CHROMagar Orientation Medium je neselektívna, budú na nej rásť aj iné patogény UTI, na ich identifikáciu sú však potrebné biochemické testy. Pôdu CHROMagar Orientation Medium vyvinul A. Rambach a predáva ju spoločnosť BD na základe licenčnej dohody so spoločnosťou CHROMagar Paríž, Francúzsko. Výživné látky v pôde BD CHROMagar Orientation Medium poskytujú špeciálne vybrané peptóny. Chromogénová zmes sa skladá z umelých substrátov (chromogénov), ktoré uvoľňujú rôzne sfarbené zlúčeniny pri rozklade špecifických mikrobiálnych enzýmov, čo umožňuje priamu diferenciáciu určitých druhov alebo detekciu určitých čeľadí organizmov použitím minimálneho množstva podporných testov. PA

2 ZLOŽENIE BD CHROMagar Orientation Medium Zloženie* na jeden liter deionizovanej vody Chromopeptón 16,1 g Chromogénová zmes 1,3 Agar 15,0 ph 6,9 +/- 0,2 *Upravené alebo doplnené podľa potreby, aby boli splnené analytické parametre. UPOZORNENIA. Iba na profesionálne použitie. Pôdu nepoužívajte, ak nesie známky mikrobiálnej kontaminácie, zmeny farby, vysušenia, prasknutia alebo iné znaky poškodenia. Ďalšie informácie o postupoch pri práci s aseptikami, o biologicky nebezpečnom odpade a likvidácii použitého produktu nájdete v dokumente VŠEOBECNÉ POKYNY NA POUŽÍVANIE. USKLADNENIE A ŽIVOTNOSŤ Prijaté misky s pôdou uskladňujte na tmavom mieste pri teplote 2 až 8 C v pôvodnom obale až do začiatku používania. Nezmrazujte a nevystavujte nadmerným teplotám. Misky môžu byť naočkované až do dňa exspirácie (uvedeného na obale) a môžu byť inkubované podľa odporúčania. Pôdy z otvorených balení po 10 kusov sa môžu používať jeden týždeň (ak sú uskladnené na čistom mieste pri teplote 2 až 8 C). KONTROLA KVALITY UŽÍVATEĽOM Reprezentatívne vzorky naočkujte nasledujúcimi kmeňmi (ďalšie informácie nájdete v dokumente VŠEOBECNÉ POKYNY NA POUŽÍVANIE). Misky inkubujte aeróbne v obrátenej polohe pri 35 až 37 C počas 20 až 24 hodín. Kmene Escherichia coli ATCC Enterobacter cloacae ATCC Proteus mirabilis ATCC Enterococcus faecalis ATCC Streptococcus agalactiae ATCC Staphylococcus aureus ATCC Staphylococcus saprophyticus ATCC (=NCTC 10516) Nenaočkované Výsledky rastu Rast dobrý až výborný; stredne veľké až veľké, tmavoružové až ružové, transparentné kolónie Rast dobrý až výborný; stredne veľké, sýtomodré kolónie s fialovými kruhmi alebo bez nich Rast dobrý až výborný; stredne veľké, svetlé až béžové kolónie obklopené smotanovým až hnedým kruhom; v oblastiach hustého rastu môže byť pôda úplne smotanová až hnedá. Plazenie je čiastočne alebo úplne inhibované. Rast dobrý až výborný; malé, modrozelené až modré kolónie Rast mierny až dobrý; kolónie neviditeľné až malé, svetlé modrozelené až svetlomodré, s kruhmi alebo bez nich Rast dobrý až výborný; stredne veľké až malé kolónie, s prirodzenou farbou (biela až krémová) Rast mierny až dobrý; malé, nepriehľadné, svetloružové až ružové kolónie Bezfarebné až veľmi svetlé smotanové, transparentné POSTUP Dodávaný materiál BD CHROMagar Orientation Medium (90 mm Petriho misky Stacker). Mikrobiologicky kontrolované. Nedodávaný materiál Pomocné kultivačné pôdy, činidlá a potrebné laboratórne vybavenie. PA

3 Typy vzoriek Táto pôda sa používa výhradne na určenie počtu a rozlíšenie baktérií v moči. Možno použiť strednoprúdový, cievkovaný alebo moč odobratý punkciou močového mechúra nad lonovou kosťou (pozri tiež VLASTNOSTI A OBMEDZENIA POSTUPU). Dodržiavajte aseptické techniky na odber vzoriek moču. Moč je potrebné očkovať na pôdu (najviac 2 hodiny po odbere) alebo ho treba ochladiť (najviac na 24 hodín), aby sa predišlo nadmernému nárastu infekčných látok alebo prímesí pred naočkovaním na túto pôdu. Postup testu Na získanie izolovaných kolónií s typickými farbami a tvarmi je nutné použiť kalibrované kľučky alebo iné techniky bežne používané na kultiváciu vzoriek moču. Použitím kalibrovanej kľučky (0,01 alebo 0,001 ml) naberte vzorku nezriedeného, dobre premiešaného moču. Zaistite správne naplnenie kľučky vzorkou. Vzorku naneste do stredu misky v jednom páse a rozotrite do strán. 6,7 Naočkované misky inkubujte aeróbne v obrátenej polohe pri 35 až 37 C počas 20 až 24 hodín. Počas inkubácie nevystavujte svetlu, pretože svetlo môže zničiť chromogény. Akonáhle sa objavia farebné kolónie, môžete ich vystaviť svetlu. Výsledky Po inkubácii sa na miskách ukážu izolované kolónie v oblastiach, kde bola očkovacia látka vhodne zriedená. Tabuľka 1 a Schéma 1 slúžia na identifikáciu alebo diferenciáciu a ako smernica pre dodatočné podporné testy. Na potvrdenie výsledkov možno použiť Gramovo farbenie a mikroskopiu. Tabuľka 1 Smernice na identifikáciu na základe rozdielnych farieb kolónií Organizmus Vzhľad na pôde BD CHROMagar Orientation Medium Podporné testy (Nutné na ďalšiu diferenciáciu) E. coli a Stredne veľké až veľké, tmavoružové až ružové transparentné kolónie s kruhmi v okolitej pôde alebo bez nich Čeľaď KES b Stredne veľké, modré až tmavomodré kolónie, s fialovými kruhmi alebo bez nich BBL CRYSTAL E/NF na diferenciáciu v rámci rodu Čeľaď PMP c Svetlé až béžové kolónie obklopené hnedými kruhmi d Indol, H 2 S e, ODC f, BBL CRYSTAL E/NF na diferenciáciu v rámci rodu Enterococcus Malé modrozelené kolónie S. agalactiae Svetlé modrozelené až modré, neviditeľné až PYR g malé kolónie s kruhmi alebo bez nich S. saprophyticus (väčšina Svetloružové až ružové, malé nepriehľadné 5 µg novobiocínový disk h kmeňov) kolónie s kruhmi alebo bez nich Iné (vrátane kvasiniek) Prirodzená (krémová) pigmentácia Príslušné biochemické alebo sérologické identifikačné testy Poznámky a h v Schéme 1 Podporné testy Podľa potreby vykonajte podporné testy (Tabuľka 1, Schéma 1). Detekčné činidlo neaplikujte priamo na kolónie na pôde BD CHROMagar Orientation Medium. Testy vykonajte na filtračnom papieri s rastom z príslušných kolónií. Pre kolónie E. coli tmavoružovej až ružovej farby, neviditeľné až malé nepoužívajte činidlo Kovacs indol, pretože farba kolónií môže rušiť červenú farbu pozitívneho indolového testu. Použite činidlo dimetylaminocinnamaldehyd (DMACA) indol (zelená = pozitívny). Ak používate podporné testy alebo biochemické identifikačné systémy, je nutné dodržiavať pokyny k týmto testom alebo systémom. Podporné testovanie pre Enterococcus vykonávajte, len ak sa vyžaduje špecifikácia nad rámec úrovne rodu. Schéma 1: Smernice na vykonávanie identifikačných testov na vybraných organizmoch Vzhľad kolónií PA

4 Malé, ružové, nepriehľadné 5 µg novobiocínový disk citlivé S. intermedius, S. simulans BBL CRYSTAL GP na diferenciáciu v rámci rodu rezistentné S. saprophyticus, S. xylosus Bezfarebné až béžové kolónie, oranžovohnedá pôda Čeľaď PMP DMACA i indolový test PA zelená (pozitívny) H 2 S pozitívny e H 2 S negatívny e bezfarebný až ružový (negatívny) ODC pozitívny f ODC negatívny f P. vulgaris Rod Providencia, rod Morganella P. mirabilis P. penneri a Pozri časť Obmedzenia postupu b KES = čeľaď Klebsiella-Enterobacter-Serratia c PMP = čeľaď Proteus-Morganella-Providencia d Smotanovú až hnedá farba je následkom pozitívnej tryptofan deamináze (TDA) bežná pre všetky organizmy čeľade PMP. Približne 50 % kmeňov P. vulgaris produkuje modré kolónie na smotanovej až hnedej pôde. e Tradičný sulfán (sírovodík) test. f Tradičný ornitín dekarboxyláza test. g Pyroglutamát test na pyrrolidonyl arylamidázu. h Naočkujte misku pôdy Mueller Hinton II Agar izolátom. Na naočkovanú misku umiestnite novobiocín (5 µg disk). Inkubujte počas 18 až 24 hodín pri 35 až 37 C a určte veľkosť inhibičnej zóny. (rezistentné: 16 mm, citlivé: > 16 mm). i DMACA = činidlo dimetylaminocinnamaldehyd na produkciu indolu. Aplikujte činidlo na filtračný papier a otrite jednu kolóniu o oblasť obsahujúcu činidlo na filtračnom papieri. Počkajte sekúnd. Zelená farba určuje produkciu indolu (červená alebo bez farby = negatívny). Výpočet a interpretácia výsledkov 6,7 Určte počet kolónií (cfu) na Petriho miske. Ak bola použitá kľučka s objemom 0,01 ml, každá výsledná kolónia predstavuje 100 CFU/ml; ak bola použitá kľučka s objemom 0,001 ml, každá kolónia zodpovedá 1000 CFU/ml moču. 7 Strednoprúdový a cievkovaný moč: Súčasné smernice naznačujú, že pri jedinom izoláte hustota 10 5 cfu/ml znamená infekciu, hustota < 10 5 cfu/ml naznačuje uretrálnu alebo vaginálnu kontamináciu a ak je hustota od 10 4 do 10 5 CFU/ml, musí byť znova vyhodnotená na základe klinických informácií. 7 Kontaminačné baktérie sa väčšinou objavujú v malých množstvách, ktoré sa menia v rámci morfológie kolónií. Moč odobratý punkciou močového mechúra nad lonovou kosťou: Keďže močový mechúr je u neinfikovaných jedincov sterilný, každá zistená jednotka cfu naznačuje infekciu. Urinárne patogény väčšinou vykazujú vysoké počty, keďže majú na tejto pôde jednotnú morfológiu kolónií a farbu. VLASTNOSTI A OBMEDZENIA POSTUPU BD CHROMagar Orientation Medium je chromogénna pôda na priamu identifikáciu, diferenciáciu a určenie počtu bežných patogénov v močovom trakte. Táto pôda je vhodná na diferenciáciu mnohých aeróbne rastúcich mikroorganizmov, napríklad čeľadí Enterobacteriaceae, Pseudomonas a ďalších nefermentujúcich gramnegatívnych paličiek, enterokokov a mnohých ďalších zo vzoriek moču. Hodnotenie účinnosti preukázalo, že pôda BD CHROMagar Orientation Medium je vhodnejšia ako iné diferenciačné pôdy používané na izoláciu, diferenciáciu a určenie počtu patogénov UTI, ako je pôda CLED Agar alebo kombinácia pôd Blood a MacConkey Agar. 3-5 Pôda BD CHROMagar Orientation Medium umožňuje deferenciáciu a identifikáciu organizmov E. coli a enterokokov bez podporného testovania, na základe kritérií na identifikáciu

5 stanovených normou komisie CLSI M35-A Skrátená identifikácia baktérií a kvasiniek; schválená smernica. 8 Predbežná identifikácia kmeňov S. saprophyticus, S. agalactiae, Klebsiella-Enterobacter-Serratia (KES) a čeľadí Proteus-Morganella-Providencia (PMP) je možná na základe morfológie a pigmentácie kolónií a zafarbenia pôdy. Pretože väčšina bežných infekcií močového traktu je spôsobených organizmami E. coli alebo enterokokmi, použitie tejto pôdy výrazne znižuje záťaž a skracuje čas na očkovanie a odčítavanie identifikačných systémov, ktoré sú nutné pri používaní tradičných pôd. Výsledky účinku 4,9,10 Mikrobiologický účinok pôdy BD CHROMagar Orientation Medium a chromogénnej konkurenčnej pôdy sa porovnával s účinkom pôdy Columbia agar with 5 % sheep blood a pôdy MacConkey agar without crystal violet za účelom určenia počtu a predbežnej identifikácie baktérií zodpovedných za infekcie močového traktu. 4 Z celkového počtu 658 klinických vzoriek moču nevykazovalo 118 vzoriek žiadny rast, 402 vzoriek vykazovalo rast s počtom buniek 10 5 CFU/ml a 138 vzoriek vykazovalo rast s počtom buniek <10 5 CFU/ml. Zo vzoriek s počtom buniek 10 5 CFU/ml bolo 163 čistých kultúr a 239 zmiešaných kultúr. Celkovo sa získalo 266 izolátov Escherichia coli na oboch chromogénnych pôdach, 260 bolo izolovaných na krvných agaroch a 248 na pôde MacConkey agar. Jeden kmeň (0,4 %) nevytvoril očakávanú ružovú farbu na pôde BD CHROMagar Orientation Medium a 23 kmeňov (8,7 %) túto farbu nevytvorilo na konkurenčnej pôde. Enterokoky (BD CHROMagar Orientation Medium, n = 266; konkurenčná pôda, n = 265) vytvorili malé modrozelené kolónie na oboch chromogénnych pôdach. Päťdesiat zmiešaných kultúr obsahovalo enterokoky detekované len na chromogénnej pôde. Kmene Klebsiella-Enterobacter-Serratia (KES) a Proteus-Morganella-Providencia (PMP) boli identifikované na oboch chromogénnych pôdach. Zo 66 izolátov kmeňa KES vyrástlo 63 v očakávanej farbe na pôde BD CHROMagar Orientation Medium a 58 zo 64 izolátov na konkurenčnej pôde. Pre iné mikroorganizmy boli nutné ďalšie identifikačné testy. Pri druhom hodnotení účinnosti s celkovým počtom 421 klinickým vzoriek moču, z ktorých 286 vykázalo rast baktérií alebo kvasiniek, sa porovnávala pôda BD CHROMagar Orientation Medium s pôdou BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood. 9 Na chromogénnej pôde sa získalo 483 izolátov a na krvnej agarovej pôde bolo izolovaných 447 kmeňov. Kmene boli identifikované biochemicky. Z kmeňov E. coli bolo 95 % správne identifikovaných na základe ich svetloružovej až ružovej farby kolónie, kým ostatné kmene E. coli neboli pigmentované. Všetky izoláty rodu Enterococcus vykázali typickú modrú až modrozelenú farbu kolónií. Izoláty Streptococcus agalactiae vyprodukovali drobné, svetlomodré a modrozelené kolónie a boli diferencované od enterokokov negatívnym testom PYR. Všetky izoláty Staphylococcus saprophyticus a S. simulans vyprodukovali malé ružové nepriehľadné kolónie, boli diferencované novobiocínovým testom a identifikované na úrovni druhov biochemickými testmi. V zaslepenej internej štúdii, ktorá obsahovala testovanie vyše 900 bakteriálnych kmeňov naočkovaných do moču, bola citlivosť a špecificita identifikácie organizmov E. coli len na základe farby a morfológie kolónií pri pôde BD CHROMagar Orientation Medium na úrovni 97 % a 99 %, pre Enterococcus bola citlivost a špecificita identifikácie 99 % a 97 %, (pozri tabulku). 10 Organizmus Citlivosť % (95 % interval spoľahlivosti) E. coli 277/ % (94,1-98,6%) Enterococcus 319/ % (96,4-99,5%) Špecificita % (95 % interval spoľahlivosti) 638/ % (97,8-99,6%) 603/622 97% (95,3-98,2%) Obmedzenia postupu Táto pôda je neselektívna, preto na nej budú rásť aj iné patogény UTI. Kolónie, ktoré majú na pôde BD CHROMagar Orientation Medium svoju prirodzenú farbu a nereagujú s chromogénnymi substrátmi, musia byť ďalej diferencované vhodnými biochemickými alebo sérologickými testmi. Ďalšie informácie v použitej literatúre. 1, 2 PA

6 Kolónie E. coli, ktoré sú tmavoružové až ružové a neviditeľné až malé, vyžadujú ďalšie podporné testy, napríklad nanesenie indolu (činidlo DMACA indol). Gramnegatívne paličky odlišné od tých, ktoré patria do čeľade KES, môžu na pôde BD CHROMagar Orientation Medium produkovať veľké modré kolónie, preto sú na ich identifikáciu nutné ďalšie biochemické testy. 11 Vo veľmi zriedkavých prípadoch môžu byť v moči prítomné Listeria monocytogenes alebo iné rody Listeria (napríklad po aborte v dôsledku týchto činidiel). Listeria bude produkovať malé modré až modrozelené kolónie, PYR-negatívne, podobné Streptococcus agalactiae. Preto môže byť užitočné pripraviť Gramovo farbenie všetkých kmeňov produkujúcich na tejto pôde drobné až malé, modré až modrozelené kolónie, ktoré sú PYR-negatívne. Prítomnosť grampozitívnych paličiek môže určovať rody Listeria, na potvrdenie ich identifikácie sú však potrebné ďalšie biochemické testy. Veľmi zriedka môžu izoláty Aeromonas hydrophila produkovať svetloružové až ružové kolónie. Možno ich diferencovať od E. coli testom oxidázy (Aeromonas = pozitívny; E. coli = negatívny). Koaguláza-negatívne stafylokoky iné ako S. saprophyticus, napríklad S. simulans, S. xylosus, a S. intermedius, občas produkujú malé ružové nepriehľadné kolónie. Preto je na týchto izolátoch nutné vykonať dodatočné testy (pozri Schému 1). Pôda BD CHROMagar Orientation Medium nepodporuje rast náročných organizmov, ako sú rody Neisseria, Haemophilus alebo Mycoplasma. Použitie tejto pôdy na neklinické alebo klinické vzorky iné ako moč neboli zdokumentované. Pred prvým použitím pôdy BD CHROMagar Orientation Medium odporúčame vyskúšať typický vzhľad kolónií s potvrdenými kmeňmi, napríklad kmeňmi spomenutými v časti KONTROLA KVALITY UŽÍVATEĽOM. POUŽITÁ LITERATÚRA 1. Isenberg, H.D. (ed.) Clinical Microbiology Procedures Handbook, vol. 1. American Society for Microbiology. Washington, DC. 2. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld Bailey & Scott s diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 3. Merlino, J., S. Siarakas, G. J. Robertson, G. R. Funnell, T. Gottlieb, and R. Bradbury Evaluation of CHROMagar Orientation for differentiation and presumptive identification of gram-negative bacilli and Enterococcus species. J. Clin. Microbiol. 34: Hengstler, K.A., R. Hammann, and A.-M. Fahr Evaluation of BBL CHROMagar Orientation medium for detection and presumptive identification of urinary tract pathogens. J. Clin. Microbiol. 35: Samra, Z., M. Heifetz, J. Talmor, E. Bain, and J. Bahar Evaluation of use of a new chromogenic agar in detection of urinary tract pathogens. J. Clin. Microbiol. 36: Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Forbes, B.A., and P.A. Granato. Processing specimens for bacteria In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, formerly NCCLS). Approved Guideline M35. Abbreviated identification of bacteria and yeast, CLSI, Wayne, PA.Search for latest version at 9. Dáta v súbore. BD Diagnostic Systems Europe, Heidelberg, Germany. 10. Dáta v súbore. BD Diagnostic Systems, Sparks, MD, USA. 11. Abbott, S.L Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Plesiomonas, and other Enterobacteriaceae. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. PA

7 BALENIE/DOSTUPNOSŤ BD CHROMagar Orientation Medium Kat. č Pôda v Petriho miskách pripravená na použitie, 20 ks Kat. č Pôda v Petriho miskách pripravená na použitie, 120 ks ĎALŠIE INFORMÁCIE Ak máte záujem o ďalšie informácie, kontaktujte miestneho zástupcu firmy BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: [email protected] CHROMagar is a trademark of Dr. A. Rambach. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company BD PA