BACTEC Standard/10 Aerobic/F Culture Vials

Transcription

1 POUŽITIE BACTEC Standard/10 Aerobic/F Culture Vials PP105JAA 2008/01 Slovenèina Kultivaèné liekovky BACTEC Standard/10 Aerobic/F (obohatený bujón so sójovo-kazeínovým hydrolyzátom) sú urèené pre aeróbne krvné kultúry. Základom je použitie s prístrojmi fluorescenčnej BACTEC, aby bola kvalitná kultivácia a rozmnožovanie aeróbnych mikroorganizmov (baktérií a kvasiniek) z krvi. ZHRNUTIE A VYSVETLENIE Testovaná vzorka sa oèkuje do jednej alebo viacerých liekoviek, ktoré sa vložia do fluorescenèného prístroja BACTEC na inkubáciu a pravidelné odèítanie. Každá liekovka obsahuje chemický senzor, ktorý dokáže zistit zvýšenie množstva CO 2 produkovaného rastom mikroorganizmov. Prístroj každých desat minút monitoruje nárast fluorescencie senzora, ktorý je úmerný množstvu prítomného CO 2. Pozitívne odèítanie indikuje predpokladanú prítomnost životaschopných mikroorganizmov v liekovke. Detekcia je obmedzená na mikroorganizmy, ktoré rastú na urèitom type pôdy. PRINCÍPY POSTUPU Ak sa v testovanej vzorke naoèkovanej do liekovky BACTEC nachádzajú mikroorganizmy, budú pri metabolizácii substrátov prítomných v liekovke produkovat CO 2. Fluorescenèný prístroj BACTEC bude monitorovat zvyšovanie fluorescencie senzora v liekovke spôsobené zvýšeným množstvom CO 2. Analýza miery a množstva zvýšenia množstva CO 2 umožòuje fluorescenènému prístroju BACTEC urèit, èi je liekovka pozitívna, t. j. že testovaná vzorka obsahuje životaschopné organizmy. ZLOŽENIE Kultivaèné liekovky BACTEC Standard/10 Aerobic/F obsahujú pred spracovaním nasledujúce aktívne zložky: Zoznam zložiek (WTR) spracovaná voda ml (SCB) bujón so sójovo-kazeínovým hydrolyzátom... 3,0 % hmotnosti/objemu (YEX) kvasnièný extrakt... 0,3 % hmotnosti/objemu (ATD) hydrolyzát zvieracieho tkaniva... 0,01 % hmotnosti/objemu (SCR) sacharóza... 0,1 % hmotnosti/objemu (HEM) hemín... 0,0005 % hmotnosti/objemu (MEN) menadión... 0,00005 % hmotnosti/objemu (PXH) pyridoxal HCl (vitamín B 6 )... 0,001 % hmotnosti/objemu (SBC) bikarbonát sodný... 0,04 % hmotnosti/objemu (SPS) polyanetolsulfonát sodný... 0,035 % hmotnosti/objemu Všetky pôdy BACTEC sa dodávajú s pridaným CO 2. Varovania a upozornenia Na diagnostiku in vitro. Tento produkt obsahuje suchý prírodný kauèuk. V klinických vzorkách sa môžu vyskytovať patogénne mikroorganizmy vrátane vírusov hepatitídy a vírusu HIV. Pri práci so všetkými materiálmi kontaminovanými krvou a inými telesnými tekutinami dodržujte Štandardné upozornenia 1-4 a smernice príslušných inštitúcií. Pred použitím každú liekovku skontrolujte, èi nenesie známky poškodenia alebo kontaminácie. Nepoužívajte liekovky vykazujúce známky poškodenia alebo kontaminácie, napr. vytekanie, zakalenie, zmena farby (stmavnutie), vydutá alebo stlaèená membrána. Kontaminovaná liekovka by mohla obsahovat pozitívny tlak. Ak použijete kontaminovanú liekovku na priamy odber, mohlo by dôjst k spätnému prietoku kontaminovanej pôdy do žily pacienta. Kontaminácia liekovky nemusí byt zrejmá na poh¾ad. Ak použijete techniku priameho odberu, pozorne sledujte jeho priebeh, aby ste zabránili spätnému prietoku materiálov do tela pacienta. Niekedy môže byt hrdlo sklenenej f¾aše prasknuté a pri odstraòovaní zátky alebo inej manipulácii sa môže odlomit. Zriedkavo sa stáva, že liekovka nie je dostatoène zapeèatená. V obidvoch prípadoch môže obsah liekoviek presakovat alebo sa vyliat. Ak bola liekovka naoèkovaná, zaobchádzajte s rozliatou tekutinou opatrne, pretože môže obsahovat patogénne organizmy/látky. Pred likvidáciou všetky naoèkované liekovky sterilizujte autoklávom. Liekovky s pozitívnou kultúrou urèené na subkultiváciu, farbenie atï. Pred oèkovaním vzorky uvo¾nite plyn, ktorý sa èasto vytvorí v dôsledku bakteriálneho metabolizmu. Odobratie vzorky vykonajte v biologicky bezpeènej komore a vo vhodnom obleèení vrátane rukavíc a masiek. Ïalšie informácie o subkultivácii nájdete v èasti Postup. Používajte injekèné striekaèky s permanentnými ihlami alebo s hrotmi znaèky Luer-Lok, aby sa minimalizovalo riziko vytekania vzorky do liekovky s kultúrou poèas oèkovania. Pokyny na uskladnenie Liekovky BACTEC sú pripravené na použitie hneï po dodaní a nevyžadujú oživenie ani zriedenie. Uchovávajte pri teplote 2 25 C na suchom mieste bez priameho slneèného žiarenia. ODBER VZORIEK Odber vzoriek vykonávajte sterilnými postupmi, aby sa znížilo riziko kontaminácie. Zvyèajný objem vzorky je 8 10 ml. Odporúèa sa oèkovat vzorky do liekoviek BACTEC pri lôžku pacienta. Väèšinou sa na odber vzorky používa injekèná striekaèka ve¾kosti 10 cc alebo 20 cc s hrotom typu Luer-Lok. V prípade potreby možno použit držiak na ihly znaèky Vacutainer, súpravu na odber krvi znaèky Vacutainer, súpravu na odber krvi Vacutainer Safety-Lok alebo inú súpravu s hadicou typu butterfly. Pri použití ihly a súpravy s hadicou (priamy odber) pozorne sledujte smer toku krvi, keï zaèínate s odberom vzorky. Vákuum v liekovke väèšinou presiahne hodnotu 10 ml, takže používate¾ musí monitorovat odobratý objem prostredníctvom znaèiek v rozstupe 5 ml na štítku liekovky. Po odobratí požadovaných 8 10 ml zastavte tok ohnutím hadièky a odpojením súpravy hadièiek z liekovky BACTEC. Možno použit aj vzorky s objemom len 3 ml, ale rast nebude taký, ako pri väèších objemoch. Naoèkovanú liekovku BACTEC èo najrýchlejšie preneste do laboratória. POSTUP Odstráòte zátku liekovky BACTEC a skontrolujte, èi nie je prasknutá, kontaminovaná, príliš zakalená a èi nemá vydutú alebo stlaèenú membránu. NEPOUŽÍVAJTE liekovku, ak je akoko¾vek poškodená. Pred oèkovaním potrite membránu alkoholom (NEODPORÚÈA SA jód). Asepticky vstrieknite alebo priamo odoberte 8 10 ml vzorky do každej liekovky. Pri vzorkách s objemom 3 4 ml nebude rast taký, ako pri väèších objemoch (pozri èast Obmedzenia postupu). Naoèkované aeróbne liekovky umiestnite èo najrýchlejšie do fluorescenèného prístroja radu BACTEC kvôli inkubácii a monitorovaniu. Ak naoèkovanú liekovku neumiestnite do prístroja hneï a pozorujete vidite¾ný rast, netestujte ju vo fluorescenènom prístroji BACTEC, radšej vykonajte subkultiváciu, Gramovo farbenie a zaobchádzajte s òou ako s pravdepodobne pozitívnou liekovkou. Pri liekovkách vložených do prístroja sa bude automaticky každých desat minút testovat doba trvania testovacieho protokolu. Fluorescenèný prístroj BACTEC urèí pozitívne liekovky (pozrite príslušnú používateľskú príručku k fluorescenčnému prístroju BACTEC). Senzor vo vnútri liekovky nebude na poh¾ad odlišný v pozitívnej a negatívnej liekovke; fluorescenèný prístroj BACTEC však dokáže urèit rozdiel vo fluorescencii. Ak bude na konci testu negatívna liekovka BACTEC Standard/10 Aerobic/F na prvý poh¾ad pozitívna (prejavy: krv èokoládovej farby, vydutá membrána, rozložená alebo ve¾mi tmavá krv), vykonajte subkultiváciu a Gramovo farbenie a zaobchádzajte s òou ako s pozitívnou liekovkou.

2 Pozitívne liekovky treba subkultivovat a pripravit na Gramovo farbenie na sklíèku. Vo ve¾kej väèšine prípadov budú organizmy vidite¾né a lekárovi možno oznámit predbežný výsledok. Subkultivácie na selektívnych pôdach a predbežný priamy bakteriostatický test citlivosti možno pripravit z tekutiny obsiahnutej v liekovkách BACTEC. Subkultivácia. Pred subkultiváciou obrát te liekovku hore dnom a na membránu položte handrièku napustenú alkoholom. Tlak v liekovke uvo¾níte vpichnutím sterilnej ihly s vhodným filtrom alebo tampónikom cez handrièku s alkoholom a membránu. Ihlu treba vybrat po uvo¾není tlaku a pred odobratím vzorky z liekovky na subkultiváciu. Zavedenie a vybratie ihly by sa malo spravit priamoèiarym pohybom, bez akýchko¾vek toèivých pohybov. Za úèelom získania maximálneho poètu izolátov môžete negatívne kultúry najprv skontrolovat farbením alebo subkultiváciou a potom ich zlikvidovat ako negatívne. KONTROLA KVALITY Kontrola kvality sa musí uskutoèòovať v súlade s platnými miestnymi alebo štátnymi nariadeniami alebo akreditaènými požiadavkami a štandardnými laboratórnymi postupmi pri kontrole kvality. Ïalšie informácie o vhodných postupoch pri kontrole kvality nájdete v relevantnej príruèke vydanej CLSI (bývalý NCCLS) a v nariadeniach CLIA. Liekovky NEPOUŽÍVAJTE po dátume exspirácie. NEPOUŽÍVAJTE kultivaèné liekovky, ktoré nesú akéko¾vek známky prasknutia alebo chyby; takú liekovku vhodným spôsobom zlikvidujte. Každé balenie (kartón) pôd obsahuje Osvedèenia o kontrole kvality. Osvedèenia o kontrole kvality uvádzajú testovacie organizmy vrátane kultúr ATCC uvedených v norme komisie CLSI, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media (Kontrola kvality pre komerène pripravené kultivaèné pôdy). 5 Èasový rozsah pred detekciou v hodinách je 72 pre všetky organizmy uvedené v Osvedèení o kontrole kvality pre túto pôdu: Streptococcus pyogenes ATCC Escherichia coli ATCC Streptococcus pneumoniae* ATCC 6305 Pseudomonas aeruginosa ATCC Candida albicans ATCC Neisseria meningitidis ATCC Alcaligenes faecalis ATCC 8750 Haemophilus influenzae ATCC Staphylococcus aureus ATCC *Kmeò CLSI Ďalšie informácie o kontrole kvality pre fluorescenčný prístroj BACTEC nájdete v príslušnej používateľskej príručke k fluorescenčnému prístroju BACTEC. OBMEDZENIA POSTUPU Kontaminácia Pri odoberaní a oèkovaní vzorky do liekovky BACTEC treba postupovat opatrne, aby sa zabránilo kontaminácii vzorky. Kontaminovaná vzorka sa odèíta pozitívne, nebude však predstavovat relevantný klinický výsledok. K takému záveru musí používate¾ dôjst na základe takých faktorov, ako je typ izolovaných organizmov, výskyt rovnakého organizmu vo viacerých kultúrach, pacientov chorobopis atï. Množenie organizmov citlivých na SPS zo vzoriek krvi Keïže krv môže voèi organizmom citlivým na SPS (napríklad niektoré druhy Neisseria) neutralizovat toxicitu SPS, je prítomnost optimálneho objemu krvi (8 10 ml) pri množení týchto organizmov výhodou. Niektoré nároèné organizmy, napríklad niektoré druhy baktérie Haemophilus, vyžadujú rastové faktory, napríklad NAD alebo faktor V, ktoré sa dajú získat zo vzoriek krvi. Ak je objem vzorky krvi 3,0 ml alebo menej, bude zrejme potrebné použit na množenie týchto organizmov vhodný doplnok. Ako nutričné doplnky môžete použiť doplnok pre náročné mikroorganizmy BACTEC FOS. Organizmy, ktoré nie sú životaschopné Rozter s Gramovým farbením z kultivaènej pôdy môže obsahovat malé množstvo organizmov, ktoré nie sú životaschopné, pochádzajúcich zo zložiek pôdy, farbiacich èinidiel, oleja na imerziu, sklenených sklíèok a vzoriek používaných na oèkovanie. Pacientove vzorky môžu obsahovat aj organizmy, ktoré nerastú na kultivaènej pôde alebo na pôdach používaných na subkultiváciu. Takéto vzorky pod¾a potreby subkultivujte na zvláštnych pôdach. 6 Kultivácia baktérie Streptococcus pneumoniae V aeróbnych pôdach je baktéria S. pneumoniae zvyèajne na prvý poh¾ad aj po otestovaní prístrojom pozitívna, ale v niektorých prípadoch sa po Gramovom farbení ani po bežnej subkultivácii nepreukáže žiadny organizmus. Ak bola naoèkovaná aj anaeróbna liekovka, organizmus je väèšinou možné obnovit aeróbnou subkultiváciou anaeróbnej liekovky. Je totiž dokázané, že tento organizmus v anaeróbnych podmienkach dobre rastie. 7 Všeobecné predpoklady Optimálne množenie izolátov dosiahnete pridaním 8 10 ml krvi. Použitie menšieho alebo väèšieho objemu môže nepriaznivo ovplyvnit množenie alebo dobu detekcie. Krv môže obsahovat bakteriostatické látky alebo iné inhibítory, ktoré môžu spomalit rast mikroorganizmov alebo ho zastavit. Ak sú prítomné organizmy, ktoré neprodukujú dostatoèné množstvo CO 2 na to, aby ich systém zistil, alebo ak sa objavil výrazný rast pred umiestnením liekovky do systému, môže dôjst k nepravému negatívnemu odèítaniu. Nepravý pozitívny výsledok sa môže objavit aj pri vysokom poète bielych krviniek. OÈAKÁVANÉ VÝSLEDKY Štúdie týkajúce sa oèkovania kultúr sa vykonávali použitím oèkovacej látky v rozmedzí od 10 do 50 CFU na jednu kultivaènú liekovku s kombináciou ATCC a neštandardnými mikrobiálnymi kmeòmi. V nasledujúcom zozname sú uvedené organizmy, ktoré boli v kultivačnej pôde BACTEC Standard/10 Aerobic/F detegované v priebehu piatich (5) dní ako pozitívne. Acinetobacter anitratus Cryptococcus neoformans Proteus mirabilis Staphylococcus epidermidis Acinetobacter lwoffii Enterobacter cloacae Providencia stuartii Streptococcus pneumoniae Alcaligenes faecalis Enterococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pyogenes (grp. A) Candida (Torulopsis) glabrata Escherichia coli Salmonella typhimurium Xanthomonas maltophilia Candida albicans Haemophilus influenzae Serratia marcescens Corynebacterium J-K Klebsiella pneumoniae Staphylococcus aureus VLASTNOSTI POSTUPU Klinická štúdia sa vykonala porovnaním krvnej kultivaènej pôdy BACTEC Standard/10 Aerobic/F a krvnej kultivaènej pôdy BACTEC Standard Aerobic/F. Vyhodnotilo sa celkom párov liekoviek. Nebola pozorovaná žiadna nepravá pozitívna liekovka. Poèas štúdie sa identifikovali tri nepravé pozitívne krvné kultivaèné pôdy BACTEC Standard/10 Aerobic/F. Miera nepravých negatívnych výsledkov sa vypoèítala na 0,2 %. Izolovaných bolo celkom 113 organizmov. V tabu¾ke 1 sú uvedené izoláty pod¾a typu pôdy. 76 (67,3 %) z nich bolo klinicky významných. Z klinicky významných izolátov bolo 53 (69,7 %) izolovaných v obidvoch pôdach, 8 (10,5 %) iba v krvnej kultivaènej pôde BACTEC Standard/10 Aerobic/F a 15 (19,7 %) iba v krvnej kultivaènej pôde BACTEC Standard Aerobic/F. Rozdiel medzi izoláciou len v krvnej kultivaènej pôde BACTEC Standard/10 Aerobic/F a izoláciou len v krvnej kultivaènej pôde BACTEC Standard Aerobic/F nebol štatisticky významný. Priemerný èas na zistenie všetkých skupín v krvnej kultivaènej pôde BACTEC Standard/10 Aerobic/F bol 20,4 hodín a v krvnej kultivaènej pôde BACTEC Standard Aerobic/F 21,5 hodín.

3 TABU¼KA 1: Klinická štúdia obnovy izolátov pod¾a druhu pôdy Organizmus Izolované IBA v pôde Izolované IBA v pôde Izolované v OBIDVOCH Standard/10 Aerobic/F Standard Aerobic/F pôdach GRAMNEGATÍVNE GRAMPOZITÍVNE KVASINKY Zoznam organizmov izolovaných v pôde BACTEC Standard/10 Aerobic/F: Candida albicans Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pneumoniae Candida tropicalis Haemophilus influenzae Staphylococcus aureus Streptococcus druhy Citrobacter diversus Klebsiella pneumoniae Staphylococcus koag. negatívne Enterobacter aerogenes Morganella morganii Staphylococcus haemolyticus Enterococcus faecalis Proteus mirabilis Streptococcus constellatus DOSTUPNOSŤ Kat. è. Opis BACTEC Standard/10 Aerobic/F Culture Vials (kultivačné liekovky), 50 liekoviek v balení. Použitá literatúra: 1. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Standard M22-A3. Quality control of commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.) Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Howden, R.J., J. Clin. Path. 1976, 29:50-53.

4

5 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, FOS, Vacutainer, Luer-Lok and Safety-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.