Archive of SID.

Transcription

1 ن ش ر ی ه م ی ک ر ب ی و ل و ژ ی د ا م پ ز ش ک ی / د و ر ه ن ه م ش م ا ر ه ا و ل پ ی ا پ ی 72- : ت ش خ ی ص م و ل ک و ل ی و ت ع ی ی ن ت و ا ل ی ا س ي د ه ا ي آ م ي ن ه ن ا ح ي ه ش ك ا ف ت گ ي ه م ا گ ل و ت ي ن ي ن د ر و ی ر و س آنفلوانزای جداشده ا ز ط ی و ر گ و ش ت ی استان خراسان ش م ا ل ی پ ژ م ا ن ب ه ا ر ی 1 س ی د ع ل ی پ و ر ب خ ش 2 ع ب د ا ل ح م ی د ش و ش ت ر ی م ح م د ع ل ی ب ه م ن ی ن ژ ا د 2 *2 1- د ا ن ش ج و ی د ک ت ر ا ی ت خ ص ص ی م ی ک ر و ب ی و ل و ژ ی د ا ن ش ک د ه ع ل و م ت خ ص ص ی د ا م پ ز ش ک ی د ا ن ش گ ا ه آ ز ا د ا س ال م ی و ا ح د ع ل و م و ت ح ق ی ق ا ت چ ک ی د ه ت ه ر ا ن ت ه ر ا ن ا ی ر ا ن 2- ب خ ش ت ح ق ي ق و ت ش خ ي ص ب ی م ا ر ي ه ا ی ط ي و ر م و س س ه ت ح ق ی ق ا ت و ا ک س ن و س ر م س ا ز ی ر ا ز ی ک ر ج ا ی ر ا ن ت ا ر ی خ د ر ی ا ف ت : 2 7 آ ذ ر ت ا ر ی خ پ ذ ی ر ش : 4 ا ر د ی ب ه ش ت ب ی م ا ر ی آ ن ف ل و ا ن ز ا ی پ ر ن د گ ا ن ی ک ی از ب ی م ا ر ی ه ا ی و ی ر و س ی م ه م د ر مرغداریهای صنعتی ک ش و ر م ی ب ا ش د و ه ر س ا ل ل خ س ا ر ا ت ت ع م د ه ه ا ی ب ه ه ص ن ع ت پ ر و ر ش ط ی و ر ک ش و ر و ا ر د م ی ک ن د. ت ش خ ی ص س ر ی ع و ی ر و س آ ن ف ل و ا ن ز ا و ت ع ی ی ن ح د ت آ ن ه ا ی ک ی ا ز ا و ل و ی ت ه ا ی م ه م م پ ی ش گ ی ر ی ی و م ب ا ر ز ه ه ع ل ی ه ا ی ن ب ی م ا ر ی د ر ک ش و ر م ح س و ب میشود. ا ز آ ز م ا ی ش RT-PCR ج ه ت ت ش خ ی ص و ی ر و س ه ا ی آ ن ف ل و ا ن ز ا و ن ی ز ب ر ر س ی ت وا ا ل ی م ح ل ش ک ا ف ت گ ی پ ر و ت ئ ی ن ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن )HA( ب ه ع ن و ا ن ی ک ش ا خ ص م و ل ک و ل ی ب ه م ن ظ و ر پیشبینی حدت س و ی ه ه ا ی آ ن ف ل و ا ن ز ا م و ر د ا س ت ف ا د ه ه ق ر ا ر رر گ ر ف ت.. د ر ا ی ن ن ت ح ق ی ق ج ه ت پ ا ی ش ب ی م ا ر ی آ ن ف ل و ا ن ز ا ن م و ن ه س و آ پ ن ا ی ا ز 0 2 و ا ح د پ ر و ر ش م ر غ گ و ش ت ی ی د ر ا س ت ا ن ن خ ر ا س ا ن ن ش م ا ل ی ی ک ه ه م ش ک و ک ک ب ه ه ب ی م ا ر ی آ ن ف ل و ا ن ز ا ب و د ن د ا خ ذ گ ر د ی د. آ ز م ا ی ش م و ل ک و ل ی RT-PCR ب ر ا س ا س ژ ن و ت ی پ ه ا ی ش ا ی ع د ر ا ی ر ا ن پ ا ی ه ر ی ز ی گ ر د ی د ک ه د ر آ ن ب ر ا ی ی ت ع ی ی ن ن ت ی پ گ ر و ه A آ ن ف ل و ا ن ز ا ا ز پ ر ا ی م ر ا خ ت ص ا ص ی ژ ن م ا ت ر ی ک س س س( M ) و ج ه ت ت ت ع ی ی ن ن ت ح ت ت ت ی پ پ ه ا ی ی H 7 H 5 H 9 ا ز پ ر ا ی م ر ه ا ی ی ا خ ت ص ا ص ی ی ژ ن ه م ا گ ل و ت ن ی ن( HA ) ا س ت ف ا د ه ش د. ج ه ت ت ع ی ی ن ت و ا ل ی ن م و ن ه ه ا ی م ث ب ت ش د ه ا ز ن ظ ر ت ی پ A ب ه ت خ م م ر غ ج ن ی ن د ا ر (SPF) ر و ز ه ت ز ر ی ق ق ش د پ س ا ز س ه ت ا پ ن ج ر و ز م ا ی ع آ ال ن ت و ئ ی ک ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز ف ر م ا ل ی ن 1 د ر صد خ ن ث ی و ج ه ت ب ر ر س ی ت س ت ه م ا گ ل و ت ی ن ا س ی و ن و ا س ت خ ر ا ج RNA ی و ی ر و س ی ا س ت ف ا د ه گ ر د ی د. س پ س ق ط ع ه ا ی ب ه ط و ل bp د ر ب ر گ ی ر ن د ه م ح ل ش ک ا ف ت گ ی ی ژ ن ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن ن ت ک ث ی ر ر و ج ه ت ت ت ع ی ی ن ن ت و ا ل ی ی ن و ک ل ئ و ت ی د ی ی ب ه ه شرکتMWG آ ل م ا ن ا ر س ا ل ش د و د ر ن ه ا ی ت ب ه ت و ا ل ی ا س ی د آ م ی ن ه ا ی ت ر ج م ه گ ر د ی د. ن ت ا ی ج ن ش ا ن د ا د ک ه ب ا ا س ت ف ا د ه ه ا ز ر و ش RT-PCR ن م و ن ه ه ه ا ی ی ا خ ذ ش د ه ا ز 4 مرغداری صنعتی ا ز ن ظ ر و ی ر و س ت ی پ A آ ن ف ل و ا ن ز ا م ث ب ت ب و د ن د. ت م ا م و ی ر و س ه ا ی ت ی پA ا ز ن ظ ر ر ت ح ت ت ت ی پ پ H 5 ل ح ا ظ 9H م ث ب ت ت ش خ ی ص د ا د ه ش د ن د ب. ر ر س ی م ح ل ش ک ا ف ت گ ی پ ر و ت ئ ی ن ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن ن ش ا ن د ا د ک ه هر 4 س و ی ه د ا ر ا ی ت و ا ل ی KSSR 7 H م ن ف ی ی و ا ز ب و د ن د ا گ ر چ ه ه ا ی ن ت و ا ل ی ن ش ا ن د ه ن د ه غ ی ر ح ا د ب و د ن س و ی ه ه ا م ی ب ا ش د و ل ی ب ا ا ل گ و ی ج د ا ی ه ه ا ی ی ق ب ل ی ی ا ی ر ا ن ن ک ه ه ع م د ت ا اا RSSR م ی ی ب ا ش د د ت ف ا و ت ت د ا ش ت ت ت. ب ه ه ط و ر ک ل ی آ ز م ا ی ش RT-PCR ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز پ ر ا ی م ر ه ا ی ا خ ت ص ا ص ی ت ح ت ت ی پ ه ا ی ر ا ی ج د ر م ن ط ق ه ت ش خ ی ص ت ف ر ي ق ي س ر ی ع و ی ر و س ه ای آ ن ف ل و ا ن ز ا اا ر ا ا م ک ا ن پ ذ ی ر م ی س ا ز د. ت غ ی ی ر د ر م ح ل ش ک ا ف ت پ ر و ت ئ ی ن ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن د ر و ی ر و س ه ا ی H 9 N 2 ر ا م ی ت و ا ن ب ه ع ن و ا ن ی ک خ ط ر ب ا ل ق و ه ج ه ت ت ب د ی ل ا ی ن و ی ر و س ه ا ب ه سویههای حاد د ر ن ظ ر گ ر ف ت. ل ذ ا پ ا ی ش م س ت م ر ت و ا ل ی ژ ن ت ی ک ی ا ی ن و ی ر و س ه ا ت و ص ی ه م ی گ ر د د. کلمات کلیدی: آ ن ف ل و ا ن ز ا ی پ ر ن د گ ا ن RT-PCR ت ح ت ت ی پ H 9 - H 5 - H 7 م ح ل ش ک ا ف ت گ ی پ ر و ت ئ ی ن ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن خ ر ا س ا ن ش م ا ل ي ن و ی س ن د ه م س ئ و ل : س ی د ع ل ی پ و ر ب خ ش آ د ر س : ب خ ش ت ح ق ي ق و ت ش خ ي ص ب ی م ا ر ي ه ا ی ط ي و ر م و س س ه ت ح ق ی ق ا ت و ا ک س ن و س ر م س ا ز ی ر ا ز ی ک ر ج ا ی ر ا ن. ت ل ف ن : پ س ت الکترونیک: apourbakhsh@rvsri.ac.ir

2 6 2 ی پ ا ی پ ل و ا ه ر ا م ش م ه ن ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن 2 6 ه م د ق م ی ا ز ن ا و ل ف ن آ ن ا گ د ن ر پ ی ک ی ز ا ای ه ی ر ا م ی ب ن ی ر ت م ه م ه د ش ش ر ا ز گ ن ا ه ج ط ا ق ن ر س ا ر س ز ا ه ک ت س ا ی س و ر ی و ت. س ا ن ی ا ی ر ا م ی ب د ا ج ی ا ه د ی ر ی و و س ک ی م و ت ر ا ط س و ت ای ه س و ر ی و ه د ا و ن ا خ ی ا ه س و ر ی و ز ا ي ض ع ب یشود. م و ن ا س ن ا ن ی ب ک ر ت ش م ل م ا و ع ء ز ج ن ا گ د ن ر پ ی ا ز ن ا و ل ف ن آ ت م ال س م و ا د م ر ط خ ک ی ن ا و ن ع ه ب و د ن ش ا ب ی م ن ا و ی ح ی ا ه ت ی ع م ج ی ن ا س ن ا و ی ن ا و ی ح ا ر د ی د ه ت د. ن ن ک ی م ا ب ا ه ن ا س ن ا ت ن و ف ع ه ت ش ذ گ ل ا س 6 ی ط ر د ه ک ی ر و ط ب ای ه س و ر ی و ی ا ز ن و ل ف ن آ ن ا گ د ن ر پ ز ا 3 پ ی ت ت ح ت ی ر ا م ی ب ن ی ا. ) )4 ت س ا ه د ش ه د ا د ص ی خ ش ت H( 5 H, 7 H, 9 ( ت ن و ف ع ا ی ی ن ی ل ا ب ت ح ت ی ا ه م ر ف ز ا ن و م ل ق و ب و ن ا ی ک ا م ر د کشنده و د ا ح ی ر ا م ی ب ا ت س ف ن ت ی ن ا ق و ف ه ا گ ت س د ف ی ف خ س ا س ا ر ب A پ ی ت ا ز ن ا و ل ف ن آ ی ا ه س و ر ی و د. ش ا ب ی م ر ی غ ت م ز ا د ی ن ی م آ ر و ن و ) HA( ن ی ن ی ت و ل گ ا م ه ی ن ع ی ی ح ط س ن ی ئ ت و ر پ )NA( م ی س ق ت ی د ن ب د. ن و ش ی م ن و ن ک ا ت 6 1 ت ح ت پ ی ت N( 1-9 ( ز ا د ی ن ی م آ ر و ن پ ی ت ت ح ت 9 و ) H 1-16 ( ن ی ن ی ت و ل گ ا م ه ی ی ا س ا ن ش ت س ا ه د ش ه ک ی م ا م ت. ) 2 و 1 2 ( د ن و ش ت ف ا ی ن ا گ د ن ر پ ا ه ن آ د ن ن ا و ت ی م ر د ه و ر گ ی ا ز ن ا و ل ف ن آ ه ب ق ل ع ت م ای ه س و ر ی و م ا م ت ن و ن ک ا ت ن ا گ د ن ر پ ر د د ا ح ی ک ی ن ی ل ک م ئ ال ع و ال ا ب ت د ح ا ب ه ک A 5H ی ا ه پ ی ت ت ح ت ه ب ق ل ع ت م ت س ا ه د ش ه د ی د و H 7 ه د و ب ا ب ای ه پ ی ت ت ح ت ء ز ج H 9 N 2 ای ه س و ر ی و. ) )2 ت س ا ر د ی ل و د ن و ش ی م ی د ن ب ه ق ب ط د ا ی ز ن ا د ن چ ه ن ی ی ا ز ی ر ا م ی ب خسارات و ت ا ف ل ت ز ا ی د ا ی ز ت ا ش ر ا ز گ ر ی خ ا ه ه د ل و ط ت س ا ه د ش ش ر ا ز گ ن ا ر ی ا کشور در ا ه ه ی و س ن ی ا ز ا ی ش ا ن ی ا ه ش و ر ز ا ی ک ی ت س ا ی ه ی د ب. ) و 1 3 ( ی ر ی گ ش ی پ و ی ر ی گ و ل ج ز ا ر ا ش ت ن ا ی ر ا م ی ب ر د ه ق ط ن م ر ا ذ گ ر ی ث ا ت ی ک ی ت ن ژ ت ا ر ی ی غ ت ز ا ع ال ط ا و ع ی ر س ص ی خ ش ت ه- ش ی ر ت س ا ی س ن ا ر ی ا ر د ا ر ی ز د. ش ا ب ی م س و ر ی و ت د ح ر ب ی ن ک و ی ا ه ن ی ط ن ر ق ی د ی د ش ر د ت ر و ص د ا د خ ر ن ی ی ع ت و د و ش ی م ه ت ش ا ذ گ ا ر ج ا ه ب د ا ح ق و ف ی ا ز ن ا و ل ف ن آ ر د ا ذ ل. د د ر گ ی م ی ق ل ت م ه م ر ا ی س ب ا ه س و ر ی و ن ی ا ت د ح ن ی ا ر د ه ع ل ا ط م ی ل ا و ت ی ک ی ت ن ژ ی ا ه د ی س ا ه ن ی م آ ر د ل ح م ی ا ه د ن ن ک ن ی ی ع ت ش ق ن که هماگلوتینین ن ی ئ ت و ر پ ی گ ت ف ا ک ش ی س ر ر ب ی ی ا ز ی ر ا م ی ب ت ف ر گ ر ا ر ق ی ا ه س و ر ی و. ) )1 ن و ن ک ا ت ا ز ن ا و ل ف ن آ ای ه ش و ر د ر ا د د ر و م ف ل ت خ م ی ا ه پ ی ت ت ح ت و ا ز ن ا و ل ف ن آ ص ی خ ش ت جهت RT-PCR ن آ ط س و ت ن ا ر گ ش ه و ژ پ ف ل ت خ م ح ر ط م و ه ت ف ر گ ر ا ک ب ی ا ه ه ی ص و ت س ا س ا ر ب ن ک ی ل. ) و 3 2 ( ت س ا ه د ش ت ش ا د ه ب ن ا م ز ا س و )WHO( ی ن ا ه ج ت ش ا د ه ب ن ا م ز ا س س ا س ا ر ب د ی ا ب ا ه ش و ر ن ی ا ز ا ک ی ر ه ب ا خ ت ن ا )OIE( م ا د د ش ا ب ی ی ا ی ف ا ر غ ج ه ق ط ن م ن آ ر د ب ل ا غ ی ا ه ه ی و س پ ی ت و ن ژ 4 3 ( د ش ا ب ر ا د ر و خ ر ب ر ظ ن د ر و م حساسیت و ن ا ن ی م ط ا ز ا ا ت ل ک ت و ر پ ب ا خ ت ن ا و ق و ف د ر ا و م ن ت ف ر گ ر ظ ن ر د ا ب. ) 9 1 و ن ی ی ع ت و ی ی ا س ا ن ش ه ب م ا د ق ا RT-PCR ش ی ا م ز آ ب س ا ن م ی ل ا و ت ی ک ی ت ن ژ ی ا ه س و ر ی و ا ز ن ا و ل ف ن آ ع ی ا ش ر د ی ف ا ک ت ا ع ال ط ا ه ک ی ل ا م ش خراسان استان ی ت ش و گ ر و ی ط. د ی د ر گ ت ش ا د ن د و ج و ا ه ن آ د ر و م ر د کار روش و د ا و م ی ت ش و گ ر و ی ط ه ل گ 0 2 ت ا ف ل ت ز ا یی ا ن وآپ س صنعتی مرغداریهای ز ا ا ز ن ا و ل ف ن آ ی ر ا م ی ب ه ب ک و ک ش م ن ا ت س ا ط ی ح م ن ا س ا ر خ ی ل ا ق ت ن ا ی ل ا م ش س و ر ی و ذ خ ا و ر د. د ی د ر گ ن ی ا ت ر و ا ج م ا ه پ آ و س خ ی ه ب ر د ش خ ب ی ز ا ر ی ز ا س م ر س و ن س ک ا و ه س س و م ر و ی ط ی ا ه ی ر ا م ی ب ل ا س ر ا. د ی د ر گ ر ه 8 پ ا و س ط و ب ر م ه ب ک ی د ح ا و ی ت ن آ ی و ا ح PBS ل و ل ح م ی س ی س ک ی ه ب ی ر ا د غ ر م ک ی ت و ی ب ط و ل خ م د ی د ر گ ن ی ا ط و ل خ م ا ب ر و د RPM ه ب ت د م 0 1 ه ق ی ق د ژ و ف ی ر ت ن ا س د ش و ز ی ن و RNA ج ا ر خ ت س ا جهت رویی ل و ل ح م ز ا ر ت ی ل و ر ک ی م ق ی ر ز ت ه ب ل خ ا د گردید. ت ش ا د ر ب م خ ت غ ر م ر ا د ن ی ن ج 9 )SPF( ه ز و ر

3 3 6 ی ل و ک ل و م ص ی خ ش ت... ه ن ي م آ ي ا ه د ي س ا ی ل ا و ت ن ی ی ع ت و RNA ج ا ر خ ت س ا ت ه ج ی ز ا س ا د ج RNA س و ر ی و ز ا ی ا ه ه ن و م ن ی ا ن ز ا ل م ع ل ا ر و ت س د ق ب ط ال ا ب خلوص با RNA ج ا ر خ ت س ا ت ی ک ن آ ه د ا ف ت س ا د. ش ت ی ک ر و ب ز م ی ا ر ب ی ز ا س ا د ج د ی س ا ی ح ا ر ط RT-PCR م ا ج ن ا ر و ظ ن م ه ب ی س و ر ی و ک ی ئ ل ک و ن ل و ل ح م ر ت ی ل و ر ک ی م ر ا د ق م ر ا ک م ا ج ن ا ی ا ر ب است. ه د ش ر ف ا ب ز ا ت س ا ی ب ی ک ر ت ه ک )Working Solution( ی ر ا ک د ی س ا ک ی ل ی ن د آ ی ل پ و )Binding Buffer( ه د ن ن ک ل ص ت م )Poly A( ژ و ف ی ر ت ن ا س و ر ک ی م ر د ر ا ر ق ک ی پ و ی ت. ت ف ر گ 1/5 س پ س ی ل ی م ر ا د ق م ی ر ت ی ل ه ف ا ض ا ن آ ه ب س و ر ی و ی و ا ح ک ی ئ و ت ن ال آ ع ی ا م ر ت ی ل و ر ک ی م. د ش س پ س ه ب ر و ظ ن م م ض ه ی ا ه ن ی ئ ت و ر پ ر ا د ق م 0 5 ه ب پ و ی ت و ر ک ی م ن ی ا. د ش ه د و ز ف ا A ز ا ن ی ئ ت و ر پ ر ت ی ل و ر ک ی م س پ س. د ش ه ب و ک ن ا د ا ر گ ی ت ن ا س ه ج ر د 2 7 ر د ه ق ی ق د 01 میزان ر ت ی ل و ر ک ی م ر ف ا ب ل ص ت م ه د ن ن ک ه ب ت ا ی و ت ح م ه د و ز ف ا ر د ر ا د ر ت ل ی ف ب و ی ت ه ن و م ن ل ا ق ت ن ا ی ا ر ب. شد مخلوط و ه د ش ل خ ا د پ و ی ت ب و ی ت 1/5 ه د ن ن ک ع م ج ی ر ت ی ل و ر ک ی م ه ب ت ف ر گ ر ا ر ق ل خ ا د و ب و ی ت م ا م ت ر ا د ر ت ل ی ف ت ا ی و ت ح م ل ق ت ن م ه ع و م ج م ه د ن ن ک ع م ج پ و ی ت ه ب ت ا ی و ت ح م ر و ب ع ی ا ر ب. د ش ز ا د ع ب. د ش ژ و ف ی ر ت ن ا س g ر د ه ق ی ق د ک ی ت د م ه ب ژ و ف ی ر ت ن ا س RNA ه ب ب و ی ت ر ا د ر ت ل ی ف ه د ی ب س چ ی ق ا ب س پ س د ش ج ر ا خ ه د ن ن ک ع م ج پ و ی ت ه ا ر م ه ه ب ت ا ی و ت ح م ر ا ر ق د ی د ج ه د ن ن ک ع م ج پ و ی ت ک ی ن و ر د ر ا د ر ت ل ی ف پ و ی ت ه د ا د ی ر ا ه م د ش و و ر ک ی م ر ف ا ب ر ت ی ل ه د ن ن ک ف ذ ح )Inhibtion Removal Buffer( ه ب ل م ا و ع پ و ی ت g ه ق ی ق د 1 ت د م ه ب ه ر ا ب و د و ه د ش ه ف ا ض ا ی ی ال ا ب ر ا د ر ت ل ی ف ه ا ر م ه ه ب ه د ن ن ک ع م ج پ و ی ت ه ر ا ب و د د ش ژ و ف ی ر ت ن ا س ت ا ی و ت ح م ج ر ا خ د ش و ی ا ر ب ن ی م و س ر ا ب پ و ی ت ا د د ج م ه ل ح ر م ن ی ا ا ت د ی د ر گ ه ا ر م ه ه د ن ن ک ع م ج پ و ی ت ا ب ر ا د ر ت ل ی ف ا ه ه د ن ن ک ت ع ن ا م م ر ت ش ی ب د و ش ی م ع ف ت ر م ی ا ر ب ن ی ا ه د ش و ر و ظ ن م م و ن ژ ا د د ج م ی ه د ا م آ پ و ی ت ی و ش ت ش ر ا د ر ت ل ی ف ن و ر د پ و ی ت ه د ن ن ک ع م ج ر ا ر ق ه د ا د د ش و ن ی ا ر ا ب ت د م ه ب ه ع و م ج م و د ش ه ف ا ض ا و ش ت ش ر ف ا ب ر ت ی ل و ر ک ی م ه ب ه د ن ن ک ع م ج پ و ی ت و د ش ژ و ف ی ر ت ن ا س g ر د ه ق ی ق د ه ا ر م ه ن و ر د ت ا ی و ت ح م پ و ی ت ج ر ا خ ه د ن ن ک ع م ج د ی د ر گ ر ا ر ق ا د د ج م ه د ا د د ش پ و ی ت ه ر ا ب و د ر ا د ر ت ل ی ف ه ب و د ش ه ف ا ض ا ر ا د ر ت ل ی ف ب و ی ت ه ب و ش ت شس ر ف ا ب ر ت ی ل و ر ک ی م g ر د ه ق ی ق د 1 ت د م شد 0 سانتریفوژ خروج منظور ه ب 0 1 ت د م ه ب ه ع و م ج م ن ی م ه ا د د ج م و ش ت شس ر ف ا ب ل م ا ک ه ی ن ا ث ر د g ژ و ف ی ر ت ن ا س. د ش س پ س ب و ی ت ب و ی ت ر ا ب ن ی ا و د ش ج ر ا خ ت ا ی و ت ح م ه ا ر م ه ه ب ه د ن ن ک ع م ج ر ا د ر ت ل ی ف ن و ر د ک ی ب و ی ت ژ و ف ی ر ت ن ا س و ر ک ی م 1/5 ی ل ی م ه د ش ص ل ا خ م و ن ژ ی ر و آ ع م ج ی ا ر ب د ش ه د ا د ر ا ر ق ی ر ت ی ل ه ب )Elution Buffer( ه د ن ن ک ق ی ق ر ر ف ا ب ر ت ی ل و ر ک ی م g ر د ه ق ی ق د 1 ت د م ه ب و شده اضاقه ر ا د ر ت ل ی ف ب و ی ت ژ و ف ی ر ت ن ا س ب و ی ت و ر ک ی م بود. ر ظ ن د ش ی و ا ح RT-PCR م ا ج ن ا ا و ی و ب و ی ت م و ن ژ ر ا د ر ت ل ی ف ج ا ر خ ت س ا ج ر ا خ ه د ش د ی د ر گ س و ر ی و و د ر و م ی ا ه ل ح ر م و د RT-PCR ت ی ک ز ا ر و ظ ن م ن ی ا ی ا ر ب )Viva two step RT-PCR Kit( م ا ج ن ا ت ه ج RNA ر ت ی ل و ر ک ی م ج ن پ ده ا ف ت س ا. د ش )Reverse Transecriptase( RT ش ن ک ا و ر ت ی ل و ر ک ی م 2 ا ب ا ر ه د ش ج ا ر خ ت س ا ط و ل خ م 0 1 pmol ت ظ ل غ ا ب )Forward( ی ی و ل ج ر م ی ا ر پ 0 1 ه ب ز ا ئ ل ک و ن ز ا ی ر ا ع ب آ ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب ا ر ن آ م ج ح و ه ب و ک ن ا 5 6 C ر د ه ق ی ق د 5 ت د م ه ب و ه د ن ا س ر ر ت ی ل و ر ک ی م د ی د ر گ ل ا ب ن د ب و ن آ س پ س 2 ت ا ب ی ک ر ت ه ق ی ق د د ر و م ر د ی و ر خ ی د ر س د. ی د ر گ ر ت ی ل و ر ک ی م 0 1 ت خ ا س ز ا ی ن 0 1 mm dntp mix ز ا ر ت ی ل و ر ک ی م ک ی ل م ا ش cdna M-unit س و ک ع م ی ر ا د ر ب ه خ س ن م ی ز ن آ ر ت ی ل و ر ک ی م م ی ن ر ت ی ل و ر ک ی م و د MuLV Reverse Transcriptase ب آ ر ت ی ل و ر ک ی م 6/5 و ) 0 1 X Buffer M-MuLV) ر ف ا ب

4 4 6 ن ش ر ی ه م ی ک ر و ب ی و ل و ژ ی د ا م پ ز ش ک ی / د و ر ه ن ه م ش م ا ر ه ا و ل پ ی ا پ ی 6 2 ب ا ع ا ری ا ز ن و ک ل ئ ا ز ا ض ا ف ه گ ر د ی د ت ا ح ج م ن ه ا ی ی ب ه 0 2 م ی ک ر و ل ی ت ر ر س ی د. م خ ل و ط ح ا ص ل ب ه م د ت ی ک س ا ع ت د ر د م ا ی 2 4 د ر ج ه س ا ن ت ی گ ر ا د ن گ ه د ا ر ی ش د. د ر و ا ک ن ش PCR غ ل ظ ت و 0 1 pmol 2 م ی ک ر و ل ی ت ر پرایمر جلویی و ع ق ب ی ن ه ا ی ی ح ج م mmol م ی ک ر و ل ی ت ر cdna ی ک میکرولیترmix 10 mm dntp و ح ج م ن ه ا ی ی 5 0/2mM م ی ک ر و ل ی ت ر ب ا ف ر پ ل ی م ر ا ز 0/4 م ی ک ر و ل ی ت ر Taq DNA پ ل ی م ر ا ز ب ا غ ل ظ ت ن ه ا ی ی د و و ا ح د مخلوط کرده و ح ج م ن ه ا ی ی ر ا ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز آ ب ع ا ر ی ا ز ن و ک ل ئ ا ز ب ه 0 5 م ی ک ر و ل ی ت ر م یرسانیم. ب ر ن ا م ه دمایی الزم ج ه ت ش ن ا س ا ی ی ت ی پ آ ن ف ل و ا ن ز ا A د ر ج ه 4 9 ش ا م ل س ا ن ت ی گ ر ا د و ا س ر ش ت ا و ل ی ه 4 0 س ی ک ل ت ک ث ی ر ش ا م ل 4 9 د ر ج ه و ا س ر ش ت م ر ح ل ه چ س ب ی د ن د ر ج ه ب ر ا ی ت ی پ H 5 A و H 7 و 2 5 ا ل گ و ب ه پ ر ا ی م ر 0 5 C ب ر ا ی H 9 ب ه م د ت ی ک د ق ی ق ه م ر ح ل ه گ س ت ر ش C 7 2 ب ه م د ت ی ک د ق ی ق ه و گ س ت ر ش ن ه ا ی ی C 7 2 ب ه م د ت 7 د ق ی ق ه م ی ب ا ش د. پ ر ا ی م ر ه ا ی ا س ت ف ا د ه ش د ه م ط ا ب ق ج د و ل )1( م ی ب ا ش ن د. ا ز آ ن ت ی ژ ن H 5 N 1 H 9 N 2 و H 7 N 2 خ ر ی د ا ر ی ش د ه ت و س ط س ا ز م ا ن د ا م پ ز ش ک ی ک ش و ر ب ه ع ن و ا ن ک ن ت ر ل م ث ب ت و ا ز آ ب گ ر د ی د. ع ا ر ی ع ن و ا ن ب ه ا ز ن و ک ل ئ ا ز تعیین توالی محل شکافت پروتئین ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن م ن ف ی ک ن ت ر ل ا س ت ف ا د ه ن م و ن ه ه ا ی ی ک ه د ر و ا ک ن ش RT-PCR ا ز ن ظ ر ت ی پ A م ث ب ت ب و د ن د ب ه د ا خ ل ت خ م م ر غ ج ن ی ن د ا ر 0 1 ر و ز ه SPF ت ز ر ی ق گردید. پ س ا ز 5-3 ر و ز 0 2 م ی ک ر و ل ی ت ر ا ز م ا ی ع ک ی س ه ا ز ح ا ص ل آ ال ن ت و ئ ی ک ب ا ر ا %01 RBC د ر ص د م خ ل و ط و در صورت د ا ش ت ن و ا ک ن ش ه م ا گ ل و ت ی ن ا س ی و ن ب ا ف ر م ا ل ی ن غ ی ر ف ع ا ل ی ک گ ر د ن د د ر و ه ز ا ر س پ س م خ ل و ط ج ه ت گ ر د ی د ا س ت خ ر ا ج و ی ر و س ه ا ت ا م و ر د RNA ا س ت ف ا د ه ق ر ا ر گ ر ف ت. ق س م ت ی ا ز ژ ن و م ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن ب ه ط و ل bp ا ز ک ه د ر ب ر گ ی ر ن د ه م ح ل ش ک ا ف ت پ ر و ت ئ ی ن ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن ا س ت ت و س ط و ا ک ن ش RT-PCR ب ا ا س ت ف ا د ه پ ر ا ی م ر ه ا ی HA ت ک ث ی ر گ ر د ی د ( ج د و ل و ا ک ن ش و م ح د و د ه ی د م ا ی ی م ش ا ب ه س و ی ه م ح ص و ل ب ک ا ر ت ک ث ی ر. ) 1 H 9 PCR گ ر ف ت ه ه م ر ا ه ش د ه ه م ا ن ب ا ب ه ب و د پ ر ا ی م ر ه ا ی ی ت ع ی ی ن م ن ظ و ر ش ر ا ی ط م ی ب ا ش د و ک ه ت و ا ل ی ج ه ت ب ه ش ر ک ت MWG ک ش و ر آ ل م ا ن ا ر س ا ل گ ر د ی د و د ر ا ن ت ه ا ت و ا ل ی ژ ن و م ی ب د س ت آ م د ه ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز ن ر م ا ف ز ا ر Bio edit Vertion 7 ب ه ت و ا ل ی ا س ی د ن ت ا ی ج ا ز د ا ر ا ی س و آ پ ه ا ی ب د س ت آ م ی ن ه ا ی ت ر ج م ه گردید. 0 2 ا ز آ م د ه م ر غ د ا ر ی ع ال ئ م ت ن ف س ی 4 م ر غ د ا ر ی ( ه ر م ر غ د ا ر ی ش ا م ل ه ش ت ن م و ن ه س و آ پ ) د ر و ا ک ن ش RT-PCR ا ز ل ح ا ظ ت ی پ A م ث ب ت ب و د ن د ش ک ل )1 ). د ر م ر ح ل ه ب ع د ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز پ ر ا ی م ر ه ا ی ا خ ت ص ا ص ی ت ح ت ت ی پ ه ا ی H 5 و H 7 م و ر د آ ز م ا ی ش قرار گرفتند که ه ر چ ه ا ر ن م و ن ه ا ز ن ظ ر م ث ب ت و ا ز ل ح ا ظ H 5 و H 9 H 9 H 7 م ن ف ی ب و د ن د ش ک ل )2 ). ت و ا ل ی ا س ی د آ م ی ن ه ا ی محل شکافت پ ر و ت ئ ی ن ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن د ر ه ر چ ه ا ر و ی ر و س ا ل گ و ی KSSR ر ا ن ش ا ن م ی د ا د ن د.

5 5 6 ت ش خ ی ص م و ل ک و ل ی و ت ع ی ی ن ت و ا ل ی ا س ي د ه ا ي آ م ي ن ه... جدول- 1: پ ر ا ی م ر ه ا ی ا س ت ف ا د ه ش د ه ج ه ت ت ش خ ی ص آ ن ف ل و ا ن ز ا ی ت ی پ A و ت ح ت ت ی پ ه ا ی H H,9 H,5 7 و پ ر ا ی م ر م و ر د ا س ت ف ا د ه ج ه ت ت ع ی ی ن ت و ا ل ی ژ ن HA ت و ا ل ی پ ر ا ی م ر TTC TAA CCG AGG TCG AAA CG ACA AAG CGT CTA CGC TGC AG TTGCACCACACAGAGCACAAT TGATGTATGCCCCACATGAA GGG GAA TGC CCC AAA TAT GT TCT ACC ATT CCC TGC CAT CC ATGTCCGAGATATGTTAAGCA TTTGTAATCTGCAGCAGTTC GCATACATCATCCACCCAC TTGATCTAGCAGGCACGTTC ا ن د ا ز ه م ح ص و ل ا خ ت ص ا ص ی M م ن ب ع )3 2 ( )0 2 ( )9( )3 1 ( )1 1 ( H 9 H 5 H 7 H A شکل- 1: ن ت ا ی ج RT-PCR ب ر ر و ی ژ ن م ا ت ر ی ک س د ر ن م و ن ه ه ا ی ا خ ذ ش د ه ا ز ط ی و ر ص ن ع ت ی A Ladder 100 bp :Lad کنترل: : م ث ب ت ژ ن م ا ت ر ی ک س bp ن م و ن ه ه ا ی ک ل ی ن ی ک ی م ث ب ت ش د ه آ ن ف ل و ا ن ز ا ت ی پ A ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز پ ر ا ی م ر ه ا ی ا خ ت ص ا ص ی ژ ن م ا ت ر ی ک س ش ک ل 2 : ن ت ا ی ج RT-PCR ب ر ر و ی ژ ن ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن ن م و ن ه ه ا ی ب د س ت آ م د ه ا ز ط ی و ر ص ن ع ت ی خ ر ا س ا ن ش م ا ل ی influenza:a Ladder 100bp:Lad Type A H 5 ی: آ ن ت H 9 ی: آ ن ت ژ ن ا س ت ا ن د ا ر د ( ک ن ت ر ل م ث ب ت ) 1 H 5N 7 H: آ ن ت ی ژ ن ا س ت ا ن د ا ر د 7H ژ ن H 9 N 2 ا س ت ا ن د ا ر د( ک ن ت ر ل م ث ب ت ) Neg ل: ک ن ت ر م ن ف ی ( ک ن ت ر ل م ث ب ت ) 4: ن م و ن ه ه ا ی ک ل ی ن ی ک ی م ث ب ت ش د ه ت ح ت ت ی پ H9N2 ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز پ ر ا ی م ر ه ا ی ا خ ت ص ا ص ی ژ ن ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن

6 ل 5 ا س 6 2 ی پ ا ی پ ل و ا ه ر ا م ش م ه ن ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن 6 6 ن ژ ک ی ت ن ژ و ل ی ف ز ی ل ا ن آ س ا س ا ر ب ن آ ی ا ه ه خ ا ش ر ی ز ا ب ه ا ر م ه ه خ ا ش م ا ن ت ی و ر د 1 ه خ ا ش. ) )6 ت س ا ه د ش ش ر ا ز گ HA ا ب ث ح ب RT-PCR ی ل و ک ل و م ش ی ا م ز آ ز ا ه ع ل ا ط م ن ی ا ر د ی ا ه ه خ ا ش و ر ص م ر د ه خ ا ش ی ز ن و د ن ا ر د ر د ج ی ا ر ی ا ه ه ی و س ی ص ا ص ت خ ا ی ا ه ر م ی ا ر پ ز ا ه د ا ف ت س ا ن ی ا ر ب ه و ال ع د. ن ت ف ا ی گسترش آسیا ر د 7 و و ت ه ج ن ئ م ط م و ع ی ر س ش و ر ک ی ن ا و ن ع ه ب ه ق ط ن م ر د. ) )6 د ن ا ه د ش م ی س ق ت ی ی ا ه ه خ ا ش ر ی ز ه ب ا ه ن آ ز ا م ا د ک ر ه شد. گرفته بهره ن آ ی ا ه پ ی ت ت ح ت و ا ز ن ا و ل ف ن آ ص ی خ ش ت ي ر و ه م ج ر د 2.2 ه خ ا ش ز ا ی ی ا ه س و ر ی و ل ا س ی گ ت ف ا ک ش ل ح م ه ن ی م آ ی ا ه د ی س ا ی ل ا و ت ی س ر ر ب ن ی ن چ م ه د ش ش ر ا ز گ ن ا ر ی ا و ر ص م ه ی ک ر ت ق ا ر ع ن ا ج ی ا ب ر ذ آ ه ب ت ب س ن ا ر ی ت و ا ف ت م ی و گ ل ا ن ی ن ی ت و ل گ ا م ه ن ی ئ ت و ر پ ی ا ه و ق ز ا H 5 N 1 س و ر ی و ل ا س ر د ن ا ر ی ا ر د. ) 5 3 ( د. ن د ا د ی م ن ا ش ن ن ا ر ی ا ی ل ب ق ت ا ش ر ا ز گ ی ز ا ر ه س س و م ط س و ت ی ل ا م ش ب ال ا ت و د ر د ی ش ح و ص ی خ ش ت ی ا ه ک ی ن ک ت ز ا ی ف ل ت خ م ع ا و ن ا ن و ن ک ا ت ی ا ه ه خ ا ش ق و ف د ر ا و م ه ب ه ج و ت ا ب. ) 4 2 ( گردید جداسازی د ن ش ا ب ی م ع ی ا ش ن ا ه ج ر د H 5 ی ا ه پ ی ت ت ح ت ز ا ی ف ل ت خ م ت ا ش ی ا م ز آ ن ی ا ی ا ه ل ک ت و ر پ و ا ه ر م ی ا ر پ ه ک ت س ا ح ض ا و س- و ر ی و ی ی ا س ا ن ش ت ه ج RT-PCR س ا س ا ر ب ی ل و ک ل و م ت ال ک ش م ز ا ی ک ی ی ل و ت. س ا ه د ش ش ر ا ز گ ا ز ن ا و ل ف ن آ ی ا ه ن ی ا ر ب ا ن ب ت. س ا ه ن آ ر ا ب ت ع ا ن ا ز ی م ن ی ی ع ت ت ا ش ی ا م ز آ ن ی ا ه د م ع ه ق ط ن م ن آ ر د ع ی ا ش ی ک ی ت ن ژ ی ا ه ه د ر ا ب ب س ا ن ت م د ی ا ب ز ی ن س ا س ا ر ب ا د ت ب ا ت ا ش ی ا م ز آ ن ی ا ه ک ت س ا ه د ش ه ی ص و ت ی ش و ر جهانی بهداشت ن ا م ز ا س س ا س ا ن ی ا ر ب. ) 4 3 ( د ش ا ب H 5 N 1 س و ر ی و ی ا ه ه د ر ه ی ل ک ه ک ت س ا ه د ر ک د ا ه ن ش ی پ ا ر ا ر 3 و 1 2 ای ه ه خ ا ش ه ل م ج ز ا ن ا س ن ا ه ب ت ی ا ر س ل ب ا ق ر د ن آ ز ا س پ و شده واقع د ی ی ا ت د ر و م OIE ی ا ه د ر ا د ن ا ت س ا ت س ا ن ی ا م ه م ه ت ک ن )91(. د ن و ش ه ت ف ر گ ر ا ک ب ه ع ر ز م ح ط س ی ک ی ن ی ل ک ی ا ه ه ن و م ن ی و ر ر ب RT-PCR ی ا ه ک ی ن ک ت ه ک ا ه ر م ی ا ر پ ی ح ا ر ط ه ک ی ی ا ج ن آ ز ا و د ن ک ی م ی ی ا س ا ن ش ت- ح ت ی ی ا س ا ن ش و ع ی ر س ص ی خ ش ت د ن ا و ت ی م صورتی در ل ا ح ر د H 5 ی ا ه س و ر ی و ی ک ی ت ن ژ ت ا ر ی ی غ ت س ا س ا ر ب صحیحی طور ه ب ا ه ن آ ر م ی ا ر پ ه ک د ن ز ا س ر س ی م ا ر ا ه پ ی ت ن ی ا ن ا ز ی م ه ک ت س ا م ز ال د ر ی گ ی م ت ر و ص ش د ر گ ع ا و ن ا س ا س ا و ه ی ا پ. ) 0 3 ( د ش ا ب ه د ش ب ا خ ت ن ا و ی ح ا ر ط و ه ت ف ر گ ر ا ر ق ر ظ ن د م ن ا ه ج ف ل ت خ م ق ط ا ن م ر د ت ا ر ی ی غ ت. ) 3 3 ( د ن ن ک ر ی ی غ ت ز و ر ق ب ا ط م ا ه ر م ی ا ر پ ص ی خ ش ت ت ه ج ه ع ل ا ط م ن ی ا ر د ق و ف ب ل ا ط م ه ب ه ج و ت ا ب ه ی ل و ا ر و ط ه ب RT-PCR ش و ر ا ب ی ص ی خ ش ت ی ا ه ت ف ا ی ه ر ع ا و ن ا ن ی ب ر د ن ژ ن ی ا ا ر ی ز میباشد. س ک ی ر ت ا م ن ژ ی ی ا س ا ن ش ی- م ه د ش ت ظ ا ف ح ر ا ی س ب A پ ی ت ا ز ن ا و ل ف ن آ ی ا ه س و ر ی و ن ا م ز ا س ی د ا ه ن ش ی پ ی ا ه ر م ی ا ر پ ز ا A پ ی ت ی ا ز ن ا و ل ف ن آ H 7 و H 5 ی ا ه پ ی ت ت ح ت ی ی ا س ا ن ش ن آ ل ا ب ن د ب د ش ا ب ن ی ا د ش ه ت ف گ ه ک ر و ط ن ا م ه و شد استفاده جهانی بهداشت ) ( ن ا ر ا ک م ه و ن م ک ا پ س ا. ) 8 2 ( د ر ی گ ی م ت ر و ص ه- د ر ی ا ز ن ا و ل ف ن آ ی ا ه س و ر ی و ز ا ی ع ی س و ف ی ط ا ه ر م ی ا ر پ د ن د ا د ر ا ر ق د ی ی ا ت د ر و م ا ر RT-PCR ت ا ش ی ا م ز آ ی گ ژ ی و ه ک ی ی ا ج ن آ ز ا. ) 3 3 ( د ی ا م ن ی م ی ی ا س ا ن ش 3 و 2 1 ی ا ه ی ص ا ص ت خ ا ی ا ه ب و ر پ ر/ م ی ا ر پ ه ک د ن د ا د ر ا د ش ه ی ل و س ک ی ر ت ا م ن ژ ی ل ا و ت س ا س ا ر ب ا ز ن ا و ل ف ن آ A پ ی ت ص ی خ ش ت ی ا ک ی ر م آ ص ت خ م H 7 و H 5 ی ا ه ه ل و ز ی ا ی ی ا س ا ن ش ت ه ج ف ل ت خ م ی ا ه پ ی ت ت ح ت ر د ی ل ا و ت ن ی ا و د ر ی گ ی م ت ر و ص ع و ن ن ی ا ر د ر و ج ا ن ل ا ص ت ا ل ا م ت ح ا د ش ا ب ی م ه د ش ت ظ ا ف ح ت- ح ت ر ی ا س ی ا ر ب ت س ا ن ک م م و شدهاند طراحی ی ل ا م ش ی ط ر د ه ک ت س ا ن ی ا ت ی ع ق ا و. ) 8 2 ( د ن ش ا ب ن ب س ا ن م ا ه پ ی ت ی ح ض ا و و ص خ ش م د ن ا ب و ) 8 2 ( د ش ا ب ی م ل ق ا د ح ا ه ر م ی ا ر پ ر س ا ر س ر د ی ا ه د ر ت س گ ی ک ی ت ن ژ ت ا ر ی غ ت ه ت ش ذ گ 1 ه خ ا ش 2 1 و ت س ا ه د ا د خ ر H 5 N 1 ی ا ه س و ر ی و ر د ن ا ه ج

7 خ ا و ر م ی ا ن ه () 7 6 ت ش خ ی ص م و ل ک و ل ی و ت ع ی ی ن ت و ا ل ی ا س ي د ه ا ي آ م ي ن ه... ب ه د ر ا ل ک ت ر و ف و ر ز ا ن ت ظ ا ر م ی ر و د و ن ت ا ی ج ب د س ت آ م د ه ن ی ز گ و ی ا ی ا ی ن م ط ل ب م ی ب ا ش د ( ش ک ل ) 1. م ن ظ و ر ت ش خ ی ص ت ح ت ت ی پ پ ر و ت ک ل ا ز ا ز H 5 ت و ص ی ه ش د ه ت و س ط ه و ف م ن و ه م ک ا ر ا ن ا س ت ف ا د ه گ ر د ی د ز ی ر ا ا ی ن ر و ش ب ر ا س ا س ش ن ا س ا ی ی Qinghai-like clade 2.2 و ی ر و س د ر ج د ا ش د ه و ی ر و س ه ا ی ا ی ر ا ن ط ر ا ح ی و ش د ه آ س ی ا ی ی ا س ت ک ش و ر ه ا ی ش ا خ ه و 9( ) ه م س ا ی ه ع م د ت ا م ت ع ل ق ب ه ش ا خ ه 2.2 ب و د ه ا ن د ( 3 ) 5. ه م چ ن ی ن ا ی ن ر و ش ب ه ع ن و ا ن ی ک ی ا ز آ ز م ا ی ش ا ت ل ی س ت ش د ه د ر ف ه ر س ت م و ر د ت ا ی ی د OIE ا س ت )91(. و ی ر و س ه ا ی ب ه ت ك ا م ل ي ت ی پ ت ح ت چ ه ا ر ش ا خ ه H 7 ا ص ل ی ب ر ا س ا س ت ق س ی م آ ن ا ل ی ز م ی ش و ن د ف ی ل و ژ ن ت ی ک ش ا خ ه آمریکای جنوبی شاخه آمریکای شمالی شاخه ا س ت ر ا ل ی ا و و ی ر و س ه ا ی ا ر و پ ا آ س ی ا ی ی ت و ا م ب ا آ ف ر ی ق ا ش ا خ ه چ ه ا ر م ر ا ت ش ک ی ل م ی د ه ن د ( 1 ) 4. ع ال و ه ب ر ا ی ن ا ر ت ب ا ط ن ز د ی ک ی ک ه ب ی ن س ا خ ت ا ر ژ ن ت ی ک ی و منطقه جغرافیایی و ی ر و س ه ا ی جدا شده ا ز ا ی ن ت ح ت ت ی پ مشاهده گردیده ا س ت ( 1 ) 4. د ر م ط ا ل ع ه ح ا ض ر ب ه م ن ظ و ر ش ن ا س ا ی ی ت ح ت ت ی پ ب ا H 7 ت و ج ه ب ه ا ر ت ب ا ط ن ز د ی ک س و ی ه ه ا ی آ س ی ا ب ا ا ر و پ ا د ر آ ن ا ل ی ز ف و ق ا ز پ ر ا ی م ر و پ ر و ت ک ل پ ی ش ن ه ا د ی آ ز م ا ی ش گ ا ه م ر ج ع ا ت ح ا د ی ه ا ر و پ ا ا س ت ف ا د ه گ ر د ی د ( 2 5 و ) 3 1. ب ر ا س ا س م ط ا ل ع ا ت ف ی ل و ژ ن ت ی ک و ی ر و س ه ا ی H 9 N 2 ب ه د و ش ا خ ه ا ص ل ی ت ق س ی م م ی ش و ن د ش ا خ ه آ م ر ی ک ا ی ی و ش ا خ ه 1 اروپایی- آ س ی ا ی ی. ش ا خ ه ا ر و پ ا ی ی و آ س ی ا ی ی ب ه ن و ب ه خ و د ح د ا ق ل ب ه س ه ز ی ر ش ا خ ه ت ق س ی م میشود: ز ی ر ش ا خ ه G1 ک ه ن م ا ی ن د ه آ ن A/Quail/Hong Kong/G1/97 ز ی ر ش ا خ ه آ ن ن م ا ی ن د ه ک ه Y280 پ ر و ت و ت ا ی پ A/Duck/Hong Kong/Y280/97 آ ن ک ه ک ر ه ش ا خ ه ز ی ر و A/chicken/Korea/38349/p96323/96 ن م ا ی ن د ه م ی ب ا ش د ( 1 ) 6. ب ر ر س ی د ر خ ت ف ی ل و ژ ن ت ی ک ن ش ا ن م ی د ه د ک ه ت م ا م 1 - Eurasian س و ی ه ه ا ی H 9 N 2 ج د ا ش د ه ا ز ا ی ر ا ن د ا ر ا ی ی ک د و د م ا ن م ش ت ر ک ب و د ه و د ر ز ی ر ش ا خ ه و ی ر و س A/Quail/Hong Kong/G1/97 ق ر ا ر م ی گ ی ر ن د ( 2 7 و ) ل ذ ا ا ن ت خ ا ب پ ر ا ی م ر ه ا ی ت ش خ ی ص ا ی ن ا ی ن ب ه ت ح ت ت ی پ ز ی ر ش ا خ ه م ع ط و ف ش د ه ا س ت از جمله پ ی ر ی س و ه م ک ا ر ا ن ( 1 99( 9 ی ک ش ا ی ع ج ف ت د ر پ ر ا ی م ر پ ر ن د گ ا ن ج ه ت ک ش و ر د ر ش ن ا س ا ی ی ه ن ک ت ح ت ک ن گ ت ی پ ر ا H 9 N 2 پ ی ش ن ه ا د ن م و د ن د ( 2 ) 0. ک م ی ب ع د ا ی ن س و ی ه ا ز م و ا ر د ا ن س ا ن ی د ر ه نگ پ ر ن د گ ا ن ک ن گ م ش خ ص ج د ا ش د ش د ب ا و ج ه ش م ق ا ی س ه ه ا ی ی آ ن د ر س و ی ه ه ا ی ب ا ژ ن ت و ا ل ی ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن ر خ د ا د ه ا س ت و ن ی ا ز ب ه ت غ ی ی ر پرایمر جهت ت ش خ ی ص ض ر و ر ی ر ا س و ی ه ه ا ا ی ن م ی س ا خ ت. ا ی ن ت غ ی ی ر ا ت ش ا م ل ج ا ی گ ز ی ن ی ن و ک ل ئ و ت ی د ی T ب ه ج ا ی C د ر م و ق ع ی ت 18 پ ر ا ی م ر ج ل و ی ی و ن ی ز ن و ک ل ئ و ت ی د C ب ه ج ا ی T د ر م و ق ع ی ت 17 پ ر ا ی م ر ع ق ب ی انجام گرفت ولی حساسیت پرایمرهای جدید س ا خ ت ه ش د ه ب ه م ن ظ و ر ت ش خ ی ص س و ی ه- ط ی و ر ه ا ی ک ا ه ش چ ش م گ ی ر ی ی ا ف ت ک ه ب ط و ر ی پ ر ا ی م ر ه ا ی ا و ل ی ه 3 ت ا 100 ب ر ا ب ر ح س ا س ت ر ا ز پ ر ا ی م ر ه ا ی ج د ی د ا ر ز ی ا ب ی ن ت ی ج ه د ر و ش د ن د م ح ق ق ی ن م ذ ک و ر پ ر ا ی م ر ه ا ی ا و ل ی ه ر ا ج ه ت ش ن ا س ا ی ی س و ی ه ه ا ی پ ر ن د گ ا ن ا ن ت خ ا ب پ ر ا ی م ر ه ا ی ن م و د ن د. ف و ق د ر ج ه ت ن ی ز ا ی ر ا ن آ ز م ا ی ش ا ت ا ز ب ع ض ی ت ش خ ی ص ی ا ز م ح ق ق ی ن ا س ت ف ا د ه ن م و د ن د ( 2 2 و ) 7. د ر م ط ا ل ع ه ح ا ض ر ن ی ز ا ز پ ر ا ی م ر ه ا ی ا و ل ی ه د ر پ ی ر ی س ا س ت ف ا د ه گ ر د ی د ک ه ک ا ه ش ب ا ت ا ح د و د ی ت ر ا ک م ب ا ن د ه ا ی م و ر د ن ظ ر ه م ر ا ه ب و د ش ک ل )2 ). ن ظ ر ب ه ا ی ن ک ه گ ز ا ر ش ا ت م ت ع د د ی م ب ن ی ب ر و ق و ع ت غ ی ی ر ا ت ژ ن ت ی ک ی ژ ن ه م ا گ ل و ت ی ن ی ن س و ی ه ه ا ی H 9 N 2 ا ی ر ا ن ا ر ا ئ ه ش د ه ا س ت ( 2 7 و 0( و م د ت ز ی ا د ی ا ز ا ب د ا ع پ ر ا ی م ر ف و ق م ی گ ذ ر د م م ک ن ا س ت ا ی ن پ ر ا ی م ر ه ا م ت ن ا س ب ب ا س و یه- ه ا ی ج د ی د ا ی ر ا ن ن ب ا ش ن د و د ر ا ی ن ز م ی ن ه ب ر ر س ی ب ی ش ت ر ی م و ر د ن ی ا ز م ی ب ا ش د.

8 6 2 ی پ ا ی پ ل و ا ه ر ا م ش م ه ن ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن 8 6 ص ت خ م ر ظ ن د ر و م ی ا ه د ن ا ب ل ی ک ش ت ه ب ه ج و ت ا ب ی ل ک ر و ط ه ب ی ز ا ر ت م ه ا ب و H 9 ی ا ه پ ی ت ت ح ت و A پ ی ت ی ا ز ن ا و ل ف ن آ ی ل ا و ت ت س د ب ن ی ن ی ت و ل گ ا م ه ر د ه د م آ ک ن ا ب ز ا ن ژ ل ح م ی ا ه ه ی و س ت ف ا ک ش ر و ک ذ م ن ی ئ ت و ر پ H 9 N 2 ر د ج ی ا ر ی ا ه پ ی ت ت ح ت ت خ ا ن ش. د ن د ش ه د ا د ص ی خ ش ت ه ق ط ن م ا ب ی ا ه س و ر ی و ت ی و ل و ا ت ف ا ک ش و ر د ه د ا ف ت س ا ی د ع ب ن ی ئ ت و ر پ ز ا ی ا ز ن ا و ل ف ن آ ی س ر ر ب RT-PCR ن ا گ د ن ر پ ی ل ا و ت ن ی ن ی ت و ل گ ا م ه ک ی ا ر ه ا گ د ی د م ی س ر ت ی د ی س ا و ن ی م آ ت س ا ه ک ی ل ک ز ا د ی ا م ن ی م ر د ش ق ن ل ح م ن ی ی ع ت ل ی د ب ت ر ط خ و ا ه س و ر ی و ت د ح ی ن ی ب ش ی پ ر د ی ا ه د ن ن ک ری- ا م ی ب ا ب ی ا ه ه ی و س ه ب ن ی ی ا پ ی ی ا ز ی ر ا م ی ب ا ب ی ا ه ه ی و س م ک ی ا ه س و ر ی و ر د ی گ ت ف ا ک ش ل ح م. ) )1 د ر ا د ال ا ب ی ی ا ز 1 ی ا ه ت ی ع ق و م ر د ن ی ن ژ ر آ ه ن ی م آ د ی س ا ک ی ی ا ر ا د ت د ح 3. د ش ا ب ی م ن ی ا ع و ن ا ه ن ی ئ ت و ر پ و ک ی ل گ ط ق ف ط س و ت د ن و ش ی م ه ت ف ا ک ش ا ه ن ی س پ ی ر ت ه ب ش ل ث م خاصی پروتئازهای د ن و ش ی م ت ف ا ی ن ا ب ز ی م ن د ب ز ا خاصی قسمتهای ر د ه ک ن د ب ز ا ی د و د ح م ط ا ق ن ه ب ا ه س و ر ی و ن ی ا ی ی ا ز ت ن و ف ع ا ذ ل ن ی ا ی ا ر ا د ه ک ش ر ا و گ و س ف ن ت ه ا گ ت س د ل ا ث م ن ا و ن ع ه ب HA0 ن ی ئ ت و ر پ ی ل و د و ش ی م د و د ح م د ن ت س ه ا ه م ی ز ن آ ع و ن ی ا ه س و ر ی و ا ب ی ی ا ز ی ر ا م ی ب ال ا ب ی و ا ح ن ی د ن چ ی- م ت ف ا ک ش ه ق ط ن م ر د ن ی ز ی ل ا ی ن ی ن ژ ر آ ی ز ا ب ه ن ی م آ د ی س ا د ن ش ا ب و ن ی ا و گ ل ا ط س و ت ی ا ه ز ا ئ ت و ر پ د و ج و م ر د م ا م ت ر د ا ق ر و ک ذ م ی ا ه س و ر ی و ا ذ ل د ن و ش ی م ه ت ف ا ک ش ن د ب ط ا ق ن ا د ی پ ر ی ث ک ت ن د ب حیاتی اندامهای و ا ه ت ف ا ب م ا م ت ر د د ن ت س ه د ن ی ا م ن. ) )1 ی ک ی ز ا ی ا ه و گ ل ا ی ا ه س و ر ی و شکافت محل در R-X-R/K-R سکانس حاد فوق ی ا ز ن ا و ل ف ن آ HA0 د ی ت و ئ ل ک و ن ک ی ط ق ف ی ن ی ز گ ی ا ج ن ی ا ر ب ا ن ب. ) 6 3 ( د ش ا ب ی م ی ا ه س و ر ی و ا ت ت س ا م ز ال 3 ت ی ع ق و م ر د G ا ی A ه ب C ل ی د ب ت KSSR/GLF سکانس با ه ع ل ا ط م ن ی ا ر د ه د ش ا د ج ی ل ب ق د ر ا و م ا ب و گ ل ا ن ی ا د. ن د ر گ د ا ح ه و ق ل ا ب ی ا ه س و ر ی و ه ب ش ر ا ز گ ه د ش ز ا ر و ی ط ی ت ع ن ص ن ا ر ی ا ه ک ا ت د م ع ر د ه ک ی ت ا ع ل ا ط م ر ی ا س. د ر ا د ت و ا ف ت د ش ا ب ی م RSSR/GLF ن ا ر ی ا ) ( ن ا ر ا ک م ه م ا ج ن ا ی م ی ر ک ه د ش و ت س ا ز ا ن ا ر ا ک م ه ه: ل م ج ) ( ) ( ی ن و ی ا م ه ر ه م و ی ف ص و ن ا ر ا ک م ه ی د ن ر م ه د ا ز ی ن ا ی ک و ) ( RSSR/GLF ی و گ ل ا ) ( ن ا ر ا ک م ه و ر ا و ل ا ی ن ا ط ل س ز ا ی خ ر ب. ) و 2 3 ( د ن ا ه د ر ک ش ر ا ز گ ا ر ی و گ ل ا 7( ( ن ا ر ا ک م ه و ی چ ن ا ی ل ق ه ل م ج ز ا ن ا ر گ ش ه و ژ پ ل ا س ر د ن ا ر ا ک م ه و ی د ا ق و RSNR و RSSR ش و ر ف ر ا ز ا ب ز ا ا ر RSNKRLF و RSNRRLF ی و گ ل ا ی ا ه ه ی ا د ج ل ی د ب ت ر ط خ و ه د و م ن ش ر ا ز گ ه د ن ز ن ا گ د ن ر پ. ) 8 و 8 3 ( د ن د و م ن م ال ع ا ا ر ال ا ب ت د ح ا ب ی ا ه ه ی و س ه ب ق و ف ز ا 2( ( ن ا ر ا ک م ه و ی گ ر ز ب ط س و ت ر گ ی د ه ع ل ا ط م ر د ی ا ه س و ر ی و ز ا ه د ش ا د ج ز ا ر و ی ط ی ت ع ن ص ن ا ر ی ا ر د ل ا س ا ر RSSR/GLF و KSSRGLF ی و گ ل ا و د ر ه ع و ق و ه ک د س ر ی م ر ظ ن ه ب ر و ط ن ی ا. ) )3 د ن د و م ن ش ر ا ز گ کشور در KSSR ی و گ ل ا ا ب H 9 N 2 ا ز ن ا و ل ف ن آ ی ا ه س و ر ی و ل ا س ع و ر ش ه د ش د. ش ا ب ه چ ر گ ا ن ی ا و گ ل ا ه د ش ه ت خ ا ن ش ن ی ی ا پ ت د ح ا ب س و ر ی و ن ا و ن ع ه ب ن ا ن چ م ه ی م و ا د م ی ک ی ت ن ژ ت ا ر ی ی غ ت ه ک د ن ک ی م ت ل ال د ی ل و ت س ا ر و ر م ه ب س و ر ی و ت د ح ا ب ط ب ت ر م ی م و ن ژ ه ا گ ی ا ج ن ی ا ر د ر د ت س ا ن ک م م و ت س ا ه د ا د خ ر ن ا ر ی ا ی ا ه ه ی و س ر د ن ا م ز ت ر و ص م ه ا ر ف ن د ش ه ن ی م ز ب س ا ن م د. ن و ش ل ی د ب ت ه د ن ی آ ر د ال ا ب ت د ح ه ب ی ی ا ه س و ر ی و ا ب ع ی ر س ش و ر ک ی ن ا و ن ع ه ب RT-PCR ش و ر ن ی ا ر ب ا ن ب د د ر گ ی م ب و س ح م ا ز ن ا و ل ف ن آ ی ا ه س و ر ی و ص ی خ ش ت ت ه ج ن ی ا ر د ه ک ی ا ه د ر ت س گ ی ک ی ت ن ژ ت ا ر ی ی غ ت ه ب ه ج و ت ا ب ی ل و ا ه س و ر ی و خ ر د ه د ی م م ز ال ت س ا ه ک ن ی ا ت ا ش ی ا م ز آ ا ر ی ص ی خ ش ت ی ا ه ل ک ت و ر پ و ا ه ر م ی ا ر پ و ه د ش ی ن ا س ر ز و ر ب ه د و د ح م ر د ع ی ا ش ی ا ه س و ر ی و ی ک ی ت ن ژ ی ل ا و ت ی ا ن ب م ر ب ک ی ر د ک ی ت ن ژ و ل ی ف ت خ ر د م س ر س ا س ا ر ب که جغرافیایی ه خ ا ش ر ا ر ق د ن ر ی گ ی م ب ا خ ت ن ا. د و م ن ا ن م ض ه ب ه ج و ت ا ب

9 9 6 ی ل و ک ل و م ص ی خ ش ت... ه ن ي م آ ي ا ه د ي س ا ی ل ا و ت ن ی ی ع ت و ه ک ن ی ا ی ل ا و ت ی ا ه ن ی م آ د ی س ا ل ح م ی گ ت ف ا ک ش ن ی ئ ت و ر پ ه ب ت ب س ن ن ا ت س ا ن ی ا ر د H 9 N 2 ی ا ه ه ی و س ن ی ن ی ت و ل گ ا م ه ا ذ ل ت س ا ه د ر ک ر ی ی غ ت ن ا ر ی ا ر د ه د ش ش ر ا ز گ ی ل ب ق د ر ا و م ر و ظ ن م ه ب ا ه س و ر ی و ن ی ا ی ک ی ت ن ژ ت ا ر ی ی غ ت م و ا د م ش ی ا پ ی ه ا گ آ ز ا ر ط خ. د د ر گ ی م د ا ه ن ش ی پ ی ن ا د ر د ق و ر ک ش ت ل ی د ب ت ن د ش ا ه ن آ ه ب ی ا ه ه ی و س د ا ح سرمسازي و ن س ك ا و ت ا ق ي ق ح ت ه س س ؤ م ز ا ه ل ی س و ن ی د ب ت س ا ه د و م ن م ه ا ر ف ا ر ه ژ و ر پ ن ی ا الزم تسهیالت که رازي ر ك ش ت و ي ن ا د ر د ق د. د ر گ ی م ن ی ن چ م ه ز ا ی ر ا ک م ه ی ر ت ش ا ر ت ک د ی ا ق آ و ی د ا ب آ ت ر ش ا م ن ا خ ر ا ک ر س ه ن ا م ی م ص ن ا گ د ن ر پ ی ا ز ن ا و ل ف ن آ س ن ا ر ف ر ه ا گ ش ی ا م ز آ ن ا ر ا ک م ه ه ی ل ک و ه س س و م. د د ر گ ی م ع ب ا ن م ن س ک ا و و م ر س ی ز ا س ی ز ا ر ی ر ا ز گ س ا پ س 6. Gavin, J.D.S. (2012). Continued evolution of highly pathogenic avian influenza A (H5N1): updated nomenclature, in Influenza Other Respi Viruses, WHO OIE FAO H5N1 Evolution Working Group: Influenza Division, Centers for Disease Control and Prevention, MS G16, Atlanta, Georgia, Ghadi, S., Bozorgmehri-Fard, M., Karimi, V., Tavassoti-Kheiri, M., Rafiei, M. (2009). Genetic analysis of hemagglutinin protein of H9N2 isolated from live bird markets in Tehran province in Iranian Journal of Virology 3: Ghalyanchi, L.A., Karimi, V., tavassoti- Kheiri, M., Bozorgmehri-Fard, M.H. (2008). Nucleotide and aminoacid sequence analysis of hemagglutinin protein in cleavage site region of H9N2 isolated from broilers in Tehran province during Journal of Animal and Veterinary Advances 7: Hoffmann, B., Harder, T., Starick, E., Depner, K., Werner, O., Beer, M. (2007). Rapid and highly sensitive pathotyping of avian influenza A H5N1 virus by using real-time reverse transcription-pcr. Journal of Clinical Microbiology 45: Homayounimehr, A.R., Dadras, H., Shoushtari, A., Pourbakhsh, S.A. (2010). Sequence and phylogenetic analysis of the haemagglutinin genes of H9N2 avian influenza viruses isolated from commercial chickens in Iran. Tropical Animal Health Production 42: Karimi, V,. Bozorgmehrifard, M., shabazzadeh, D., Esmaelizad, M., Pourbakhsh, S.A. (2004). Sequence analysis and phylogenetic study of hemagglutinin gene of H9N2 subtype of avian influenza virus isolated during in iran. Iranian Biomedical Journal 8: Alexander, D.J. (2008). Avian influenza - diagnosis. Zoonoses Public Health 55: Alexander, D.J. (2007). An overview of the epidemiology of avian influenza. Vaccine 25: Bozorgi, A., Keyvanfar, H., Shushtari, H., Bahmaninejad, M., Eshratabadi, F. (2012). Molecular characterization and phylogenetic analysis of hemagglutinin and neuraminidase genes of H9N2 avian influenza viruses isolated in Iran in 1999 and African Journal of Microbiology Research 6: , 4. Capua, I., Alexander, D.J. (2006). The challenge of avian influenza to the veterinary community. Avian Pathology 35: Chaharaein, B., Omar, A.R., Aini, I., Yusoff, K., Hassan, S.S. (2009). Detection of H5, H7 and H9 subtypes of avian influenza viruses by multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction. Microbiol Reserch 164:

10 6 2 ی پ ا ی پ ل و ا ه ر ا م ش م ه ن ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن 0 7 H9N2: Aspects of Laboratory Diagnosis. Journal of Clinical Microbiology 37: Pourbakhsh, S.A., Khodashenas, M., Kianizadeh, M., Goodarzi, H. (2000). Isolation and identification of avian influenza virus H9N2 subtype. Archive Razi Institute 51: Saberfar, E., Najafi, A., Goodarzi, Z., Lashini, H. (2009). Multiplex Reverse Transcription-PCR assay for detection of type A influenza virus plus differentiation of avian H7 and H9 hemagglutinin subtypes in Iran. Iranian Journal of Public Health 38: Saberfar, E., Najafi, A., Lashini, H. (2008). A Reverse transcription-pcr assay for detection of type A influenza virus and differentiation of avian H7 subtype. Iranian Journal of Virology 2: Shoushtari, A., Hablolvarid, M.H., Vascellari, M., Hedayati, A. (2007). Mortality of wild swans associated with naturally infection with highly pathogenic H5N1 avian influenza virus in Iran. Archives of Razi Institute 62: Slomka, M.J., Coward, V.J., Banks, J., Londt, B.Z., Brown, I.H., Voermans, J., Koch, G., Handberg, K.J., Jorgensen, P.H., Cherbonnel-Pansart, M., Jestin, V., Cattoli, G., Capua, I., Ejdersund, A., Thoren, P., Czifra, G. (2007). Identification of sensitive and specific avian influenza polymerase chain reaction methods through blind ring trials organized in the European Union. Avian Diseases 51: Slomka, M.J., Pavlidis, T., Banks, J., Shell, W., McNally, A., Essen, S., Brown, I.H. (2007). Validated H5 Eurasian real-time reverse transcriptasepolymerase chain reaction and its application in H5N1 outbreaks in Avian Diseases 51: Soltanialvar, M., Shoushtari, H., Bozorgmehrifard, M., Charkhkar, S., Eshratabadi, F. (2010). Molecular 12. Kianizadeh, M., Pourbakhsh, S.A., Toroghi, R., Momayez, R. (2006). Pathogenecity and haemagglutinin gene sequence analysis of Iranian influenza H9N2 viruse isolated during Iranian Journal of Veterinary Research, University of Shiraz 3: Laboratory, A.I.C.R. (2007). One Step RT PCR for detection of H5 & H7avian influenza & cleavage site sequencing, in the standard operating procedure used by the avian influenza CRL at the Veterinary Laboratories Agency, Lebarbenchon, C., Stallknecht, D.E. (2011). Host shifts and molecular evolution of H7 avian influenza virus hemagglutinin. Virology Journal 8: Lee Ms Fau-Chang, P.C., Chang P.C., Fau-Shien, J.H., Shien Jh., Fau-Cheng, M.C., Cheng Mc., Fau-Shieh, H.K., Shieh, H.K. (2001). Identification and subtyping of avian influenza viruses by reverse transcription-pcr. Journal of Virological Methods 97: Matrosovich, M.N., Krauss, S., Webster, R.G. (2001). H9N2 influenza A viruses from poultry in Asia have human virus-like receptor specificity. Virology 281: Moosakhani, F., Shoshtari, A.H., Pourbakhsh, S.A., Keyvanfar, H., Ghorbani, A. (2010). Phylogenetic analysis of the hemagglutinin genes of 12 H9N2 influenza viruses isolated from chickens in Iran from 2003 to Avian Diseases 54: Nagarajan, S., Tosh, C., Smith, D.K., Peiris, J.S., Murugkar, H.V., Sridevi, R., Kumar, M., Katare, M., Jain, R., Syed, Z., Behera, P., Cheung, C.L., Khandia, R., Tripathi, S., Guan, Y., Dubey, S.C. (2012). Avian influenza (H5N1) virus of clade in domestic poultry in India. PLoS One 7: OIE, (2009). Avian influenza, in OIE Terrestrial Manual, Peiris, M., Yam, W.C., CHAN, K.H., Shortridge, K. (1999). Influenza A

11 1 7 ی ل و ک ل و م ص ی خ ش ت... ه ن ي م آ ي ا ه د ي س ا ی ل ا و ت ن ی ی ع ت و 35. WHO (2011). Programmes and projects, influenza, Updated unified nomenclature system for the highly pathogenic H5N1 avian influenza viruses, Technical Resources and Current Trees/Alignments, H5 full tree pdf. 36. Wood, G.W., McCauley, J.W., Bashiruddin, J.B., Alexander, D.J. (1993). Deduced amino acid sequences at the haemagglutinin cleavage site of avian influenza A viruses of H5 and H7 subtypes. Archive of Virology 130: characterization of hemagglutinin and neuramidase genes of H9N2 avian influenza viruses isolated from commerical broiler chicken in Iran. Journal of Biological Sciences 10: Spackman, E., Senne, D.A., Myers, T.J., Bulaga, L.L., Garber, L.P., Perdue, M.L., Lohman, K., Daum, L.T., Suarez, D.L. (2002). Development of a Real- Time Reverse Transcriptase PCR assay for type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes. Journal of Clinical Microbiology 40: Spackman, E., Suarez, D.L. (2008). Detection and identification of the H5 hemagglutinin subtype by real-time RT- PCR. Methods in Moecularl Biol 436: Starick, E., Romer-Oberdorfer, A., Werner, O. (2000). Type- and subtypespecific RT-PCR assays for avian influenza A viruses (AIV). Journal of Veterinary Medicine 47: Toroghi, R., Momayez, R., Pourbakhsh, S.A. (2003). Amino acid sequence of cleavage site of hamagglutinin protein in three avian influenza virus (H9N2). Pajouhesh and Sazandegi 60: Vasfi Marandi, M., Bozorgmehri-Fard, M.H. (2002). Isolation of H9N2 subtypes of avian influenza viruses during an outbreak in chickens in Iran. Iranian Biomed Journal 61: WHO (2007). Recommendations and laboratory procedures for detection of avian influenza A(H5N1) virus in specimens from suspected human cases: Geneva, WHO (2011). The use of PCR in the surveillance and diagnosis of influenza, in Report of the 4th meeting of the WHO working group on polymerase chain reaction protocols for detecting subtype influenza A viruses,geneva,switzerland, 1-10.

12 Journal of Veterinary Microbiology, Volume 9, Issue 1, 2013 Molecular Diagnosis and Determination of Amino Acid Sequence of Hemagglutinin Cleavage Site of Avian Influenza Viruses Isolated from Broilers in North Khorasan Province Bahari, P. 1, Pourbakhsh, S.A. 2 *, Shoushtari, H. 2, Bahmaninejad, M.A Department of Microbiology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran 2- Department of Research and Diagnosis of Poultry Diseases, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran Received Date: 17 December 2012 Accepted Date: 24 April 2013 Abstract Avian influenza virus has been recognized as one of the most important pathogen in poultry that caused economic losses to the poultry industry of Iran. Rapid detection and pathotyping is the important priority in order to prevent extension of disease in Iran. RT-PCR method was used for the rapid detection of influenza viruses. The amino acid sequence of cleavage site of hemagglutinin was considered as a molecular determinant for the prediction of pathogenicity influenza viruses. In this study, 160 tracheal swabs samples were taken from 20 poultry farm to monitor influenza infection in North Khorasan province. RT-PCR assay was developed based on the most common genotype in Iran detecting type A and H9, H5 and H7 subtypes by specific primers targeting Matrix (M) and Hemagglutinin(HA) genes, respectively. The samples which were positive as type A influenza inoculated to embryonated eggs of 9-10 days. After 3-5 days, the allantoic fluids were tested with Hemagglutinin assay. The samples that contained HA activity were inactivated with formalin 0.1%. These fluids were used for RNA extraction. A segment of 432bp was amplified by RT-PCR and nucleotide sequencing. The results showed that four poultry farms were positive for type A of influenza virus. All of them were negative for H5 or H7 but positive for H9 virus. The sequence analysis of hemagglutinin revealed that four isolates shared a KSSR motif at the cleavage site of HA. Although this motif represented low pathogenicity in poultry, it was different from previous Iranian isolates. As a result RT-PCR assay based on common genotype in region was considered as a rapid test for the detection of influenza viruses. The cleavage site sequence analyses indicated that these viruses have the potential for emerging highly pathogen influenza viruses. Therefore, continuous monitoring of viruses is being recommended. Keywords: Avian influenza, RT-PCR, H9-H7-H5 subtype, Cleavage site of hemagglutinin, North Khorasan *Corresponding author: Pourbakhsh, S.A. Address: Department of Research and Diagnosis of Poultry Diseases, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran. Tel: apourbakhsh@rvsri.ac.ir